竹节参总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖抑制作用的研究

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1、竹节参总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖抑制作用的研究【摘要】　　目的研究竹节参总皂苷（TSPJ）对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的影响。方法酶消化法进行胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞的原代培养，MTT法检测TSPJ对滑膜细胞增殖的影响，流式细胞仪检测TSPJ对滑膜细胞凋亡率的影响。结果TSPJ可明显抑制体外培养的CIA大鼠滑膜细胞的增殖，TSPJ可诱导滑膜细胞凋亡。结论TSPJ可有效抑制体外培养的胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖，这可能是其治疗类风湿关节炎的机制。【关键词】竹节参总皂苷类风湿关节炎滑膜细胞细胞凋亡Ab

2、stract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsoftotalSaponinsofPanaxjaponicusontheproliferationandapoptosisofsynoviocytesincollagen-inducedarthritisratsinvitro.MethodsPrimarysynoviocytesaticdigestion.SynoviocytesinedbyMTTcolorimetricassay.Theapoptosisrateofsynovialcellsine

3、dbyfloeter.ResultsTotalsaponinsofPanaxjaponicushadmarkeddose-dependentinhibitoryeffectsonsynovialcellproliferation.ApoptosisratearkablesuppressiveeffectsonproliferationofsynoviocytesofCIAratsinvitro.ThismaybethemechanismofRAtreatment.　　Keyatoidarthritis；Synoviocytes

4、；Apoptosis　　类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为主要特征的自身免疫性疾病,其关节滑膜细胞功能的改变直接影响病理进程。在多种炎性因子的刺激下,关节滑膜细胞肿瘤样无限增生,对关节软骨、骨造成进行性破坏,最终导致关节畸形和功能障碍。因此，对关节滑膜细胞的保护在治疗中具有重要意义。竹节参RhizomaofPanaxjaponicus系五加科人参属植物竹节参的干燥呈竹鞭状根茎，民间常用其治疗病后虚弱、风湿痹证、筋骨疼痛、虚损劳伤等疾患［1］。研究表明竹节参主要活性成分为皂苷类［2］

5、。本实验研究竹节参总皂苷体外对胶原诱导性关节炎（collagen-inducedarthritis，CIA）大鼠滑膜细胞增殖的影响，并检测滑膜细胞凋亡率的变化，来探讨竹节参总皂苷对类风湿关节炎的可能作用。　　1材料　　1.1药物　　竹节参采于湖北省宜昌五峰山区，经鉴定为五加科人参属植物竹节参的根茎，洗净，晒干，打成粗粉。　　1.2动物　　清洁级雄性TT)及二甲基亚矾(DMSO)均为Amresco公司产品；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司产品；PRMI-1640培养基和VybrantApoptosisAssayKit#4

6、为Invitrogen公司产品。　　2方法　　2.1药物制备　　竹节参药材粗粉经75%乙醇回流提取浓缩后用水饱和的正丁醇萃取，再浓缩干燥后加水溶解后上D101大孔吸附树脂，水洗，10%乙醇洗，然后收集70%乙醇洗溶液部分，浓缩后干燥即得竹节参总皂苷粉末。用RPMI-1640培养液稀释竹节参总皂苷至所需浓度，0.22μm的微孔滤器除菌分装，4℃保存备用。　　2.2大鼠CIA模型的制备［3］　　将一定量的Ⅱ型胶原溶于0.1mol/L的冰醋酸（Ⅱ型胶原浓度为2mg/ml），在4℃下搅拌充分溶解，置4℃冰箱过夜。将Ⅱ型胶原溶液滴加至冷

7、的不完全弗氏佐剂(InpleteFreund'sadjuvant,IFA)中，将二者等体积混合，充分乳化，制成CⅡ乳剂。置4℃冰箱保存备用。每只大鼠分5点皮内注射0.5mlⅡ型胶原溶液（背部4点、尾根部1点），每点0.1ml。7d后，同样方法再加强注射1次。　　2.3滑膜细胞的分离与培养［4，5］　　模型制备21～35d后，大鼠脱臼处死，置于75％酒精浸泡2min，膝关节局部酒精消毒于膝关节正中纵行切开皮肤，分离肌肉，露出膝盖骨，继续向下分离，可见平滑光亮的滑膜组织，用手术剪分离关节囊的滑膜层和纤维层，然后取出滑膜层组织。用同

8、法采集另一侧膝关节滑膜层组织。将取得的滑膜组织用含青、链霉素的D-Hanks液浸泡后，经D-Hanks液和RPMI-1640培养液漂洗后将滑膜组织剪碎成小块，然后加入含Ⅰ型胶原酶的RPMI-1640培养消化。待消化6～8h后离心，加RPMI-1640培养液吹打混匀细胞沉淀，置