银耳多糖的提取及其对小鼠免疫功能的影响

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1、维普资讯http://www.cqvip.com安徽农业科学，JournalofAnhuiA．Sci．2007，35(26)：8090—8091责任编辑曹淑华责任校对王森银耳多糖的提取及其对小鼠免疫功能的影响袁思霓，张峰(长江大学生命科学学院，湖北荆卅l434025)摘要『目的1探究银耳多糖的提取方法及银耳多糖对动物机体免疫功能的影响。【方法】以水浸醇提法提取银耳多糖，并采用蒽酮比色法测定多糖的得率。设置3组不同剂量的银耳多糖对小鼠进行免疫功能的测定。通过测试胸腺、脾脏的重量，考察机体内T、B淋巴细胞的水平，同是进行

2、碳粒廓清试验，观察银耳多糖对小鼠巨噬细胞功能的影响。『结果1该法提取的银耳多糖得率为l9．8％，随银耳多糖剂量的增加，小鼠脾脏重量增加而胸腺重量减轻，不同剂量的银耳多糖对此作用的大小顺序为lg，kg组<2g，kg组<4g，kg组。『结论1银耳多糖能降低小鼠对碳粒的廓清作用，且剂量与作用效果是一定的线性关系。关键词银耳多糖；提取；胸腺；脾脏；碳粒廓清中图分类号08l9文献标识码A文章编号O517—661l(2oo7)26-08090-02多糖是来自于高等植物、动物细胞膜、微生物的细胞壁1．5免疫功能检测中的天然大分子物

3、质，是所有生命有机体的重要组成成分(1)将供试小鼠随机平分成4组，每组雄性4只，雌性1并与维持生命所必须的多种功能有关。多糖不仅能激活T只。记录各组小鼠前3d日饮水量每日给银耳多糖量按表1。细胞、B细胞、巨噬细胞(M中)、自然杀伤细胞(NK)、细胞毒(2)给药。每日8：30左右按表1给药，连用7d，对照组T细胞(CTL)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)等免疫细给等量饮用水。胞，还能促进细胞因子生成，活化补体，对免疫系统发挥多表1每日给药剂量IIll方面的调节作用阎。该试验所采用的水浸醇提法提取银耳多糖，采用蒽酮比色

4、法测定多糖得率，通过测试胸腺、脾脏的重量以及碳粒廓清试验探讨银耳多糖对小鼠免疫功能的影响，为进一步研究银耳多糖的提取方法以及银耳多糖对动物机体免疫功能的影响提供理论依据。注：对照组为空白对照；银耳多糖浓度I组、Ⅱ组、Ⅲ组分别为1、2、4g，kg。下表同1材料与方法1．1材料市售银耳(产地福建古田)，购自荆州市好邻居(3)免疫检测研。①给药7d后，各组小鼠经尾静脉注射超市；昆明系小白鼠，体重25～30g，由湖北中医药高等专科墨汁稀释液(生理盐水：墨汁=2：1)，剂量为0．1ml／lOg体重。学校提供。对照组按上计算方法

5、注人生理盐水。注射完毕后立即记时。1．2粗多糖溶液的提取⋯将市售银耳于机械粉碎机中完②注射墨汁后2～20min内，分别从各小鼠眼眶后静脉丛取全粉碎，称取80g平均分装在4个1000ml的大烧杯中。各血40ul，于4rnl碳酸钠溶液中，摇匀。用722型分光光度计烧杯均加水至1000ml，在60～80℃下水浴加热4h，再补水于600nm波长处测吸光值(OD)，以碳酸钠溶液为空白对至1000ml，再在同种温度下水浴16h，4000r／min室温下照。③拉脱颈椎处死小鼠，称量体重，并解剖取出肝脏、胸腺离心20min，取上清于

6、大烧杯中，即得粗多糖溶液。和脾脏用分析天平称重。1．3多糖的纯化_11将提取的粗多糖溶液中加人1／4体积的2结果与分析Sevag试剂(氯仿：正丁醇=4：1)，在磁力搅拌器上搅拌至不再2．1多糖提取率将样品糖溶液OD值0．120代人回归方分层为止。4000r／min离心20min，取上清液。在上清液中程得样品糖稀释后的浓度为0．158mg／n~，则样品多糖溶液加人3倍体积浓度95％乙醇后，静置到两层分界明显。弃的浓度为14．8mg／ml，得总糖量为15．8x100=15800mg。因去上层乙醇相，得下层流体状物质即为含

7、水的银耳多糖。将此，按提取率(％)=(糖量／银耳重量)xlO0计算，多糖得率为此流体状多糖在60～70℃下烘干便得到银耳多糖浆状物，(15800／80O00)xlO0=19．8％。2．2不同剂量银耳多糖对小鼠免疫器官的影响将胸腺、再用蒸馏水将其定容至1000ml。脾脏的质量和体重按下列公式分别计算胸腺指数和脾脏指1．4得率测定I6]①配制蒽酮试剂。小心量取浓度95％的硫酸溶液95ml加人170mg蒽酮，小心摇匀至无蒽酮固体数：胸腺指数=(胸腺质量×10)，体重；脾脏指数=(脾脏质量X10)／~k重。计算结果见表2。悬

8、浮物存在，避光保存。②配制标准葡萄糖溶液。称取葡萄糖25mg，用蒸馏水溶解并定容至250ml，滴加5滴甲苯防表2不同剂量银耳多糖对小鼠免疫器官的影响腐。③配制样品糖溶液。自1000ml多糖溶液中取2．5rnl加蒸馏水定容至250ml。④制作标准曲线。以吸光度为纵轴，各标准溶液为横坐标得：一元线性回归方程为y=O．829一0．0109，r=0．9