比色法测定含酶饲料还原糖的研究

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1、《儡料工业》·2009年第30囊帮23期梭比色法测定含酶饲料还原糖的研究李建文蔡震方熊睿比色法测定还原糖是仪器分析方法的一种。其基将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入100ml容量本原理是3，5一二硝基水杨酸试剂(DNS)与还原糖共瓶中，用水稀释到刻度，备用。热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，1．1．4样品中还原糖的测定反应液的颜色强度与还原糖的含量呈比例关系。利用按葡萄糖标准曲线的制定方法，测得光吸收值。分光光度计测定反应液的吸光值就可测得样品的含在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式可糖量。比色法是目前使用较为广泛的一种还

2、原糖测定计算出饲料样品内还原糖的百分含量。方法，是半微量定糖法。相对于滴定法及高锰酸钾法还原糖(％)：堕彗仟日口里薯里×100％而言。比色法具有操作简便、快速、杂质干扰较少等特点。试验表明，利用比色法测定小麦样品中还原糖回1．2试验材料与方法收率可达94．8％。由于比色法测定还原糖时，需在一1．2．1试验材料定的温度下进行溶样操作，一方面。不同的溶样温度还原糖测定试剂及器材，粉状饲料(小麦，68％；和溶样时间对测定结果有一定的影响；另一方面，饲豆粕，25％；菜粕，7％)。料中非淀粉多糖酶对饲料中的非淀粉多糖产生催化1．2．2试验方法分解作用．对

3、还原糖测定结果也有一定的影响。研究设置了40、60、80min三个溶样时间水平，40、50、比色法测定饲料还原糖的溶样条件，消除含酶饲料样60℃三个温度水平进行二因素三水平的对比试验。品酶制剂对测定结果的影响。可为准确测定含酶饲料1_3试验结果与分析还原糖提供参考。测定结果见表1、表2、表3。1溶样条件表1不同温度、不同时间溶样还原糖测定值1．1比色法测定还原糖的基本方法1．1．1试剂及器材①试剂：DNS试剂、0．1％葡萄糖标准液、85％乙醇溶液。②器材：吸量管(2、10m1)、容量瓶(100m1)、烧杯(100m1)、量筒(100m1)、蒸馏

4、设备、分析天平、离心机、电热恒温水浴锅、UV一4802型分光光度计等。1．1．2葡萄糖标准曲线的制定配制不同浓度的葡萄糖溶液．并测定其与DNS表2不同溶样温度还原糖测定均值比较(mg／g)反应后的光吸收值，以吸光度值为横坐标，葡萄糖浓度为纵坐标绘制出标准曲线，即为葡萄糖标准曲线。注：肩标不相同者表示差异极显著(PO．05)。下表同。准确称取0．2g饲料(过60目，下同)，放入100ml表3不同溶样时间还原糖测定均值~(mg／g)烧杯内．加入85％乙醇25ml，混匀，在一定恒

5、温水浴中保温一定时间，过滤，滤渣再用85％乙醇提取二次。对20、40、50、6O℃溶样温度进行预测定试验，在李建文，武汉工业学院，副教授，430023，湖北省武汉市汉30min溶样条件下，发现温度越高，测定值越大。而在口常青花园中环西路特1号。超过65℃时，发现试样中出现不明杂质。故设置了蔡震方、熊睿，单位及通讯地址同第一作者。40、50、60℃三个温度水平进行测定比较。结果表明，收稿日期：2009—11-0250℃溶样温度相对于40℃还原糖测定值有极显著fP<技术李建文等：比色法测定含酶饲料还原糖的研究o．o1)增加；相对于60clC，测定值

6、没有明显增加fP>0．05)。不会引起还原糖的测定值变化(P>O．05)。③当处理温60cc溶样条件中，样品中还出现少许不明杂质，还原度为115oC，时间为100min时．含酶饲料还原糖含量糖测定值的稳定性较差。可见50℃是最佳溶样温度。与不含酶不经处理饲料还原糖含量无显著差异fP>延长溶样时间，还原糖测定值有一定的递增。通0．051，且测定平均值接近。过对40、60、80min三个溶样时间递度进行对比试表5不同干热温度及处理时间饲料还原糖测定值(mg／g)验，结果表明，溶样时间为60min时，相对于40rain，还原糖测定值有极显著增加(P<

7、O．O1)，80与60min相比，溶出率没有明显增~fI(P>O．051。1．4小结试验结果表明，利用比色法测定饲料中还原糖，最佳溶样温度为50℃，溶样时间为60min。2含酶饲料酶制剂灭活方法的研究2．1试验目的据资料表明．50℃左右是多数非淀粉多糖酶的活性温度。也就是说在溶样条件下，非淀粉多糖酶会产资料表明，饲料中常用的非淀粉多糖酶在95c【=生催化降解作用。采用这种测定方法所测定的还原糖时，酶会产生失活。李清峰等研究表明饲用木聚糖酶含量并不能代表原样还原糖含量。试验证明同料含有在95c《=时，活性损失率较高，但不能较显著地灭活。非淀粉多糖

8、酶时，其还原糖测定值为(9．01_+0．20)mg／g，预前试验表明，通过95℃处理，含酶饲料样品还原糖极显著(P<0．01)高于不含酶样品f(4．2