糖尿病心肌病心肌纤维化病理变化的研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com中国实用医药2008年3月第3卷第9期ChinaPraeMed，Mar2008，v01．3，N0．9·73·糖尿病心肌病心肌纤维化病理变化的研究解辉【摘要】目的研究糖尿病大鼠不同病程心肌纤维化及其相关病理的变化。方法①制造糖尿病大鼠心肌模型随机分组；②氯胺T法测定羟脯氨酸含量，代表心肌胶原总含量。心肌免疫组织化学染色测定心肌胶原蛋白(CollagenI、CollagenIII)和心肌型肌动蛋白(一aetin)及转化生长因子B平均积分光密度；③心肌病理改变的光镜和透射电镜观察。结果糖尿病病程6个月组心肌胶原总含量明显高于病

2、程3个月以内组(P<0．O1)。病程3个月之后CollagenI表达伴随TGF—B的表达开始较健康鼠明显增加(P<0．O1)。一aefin蛋白表达较健康鼠明显减少(P<0．O1)。病程3个月后一aetin蛋白表达明显减少，有糖原沉积现象。结论CollagenI呈现持续性增加是糖尿病鼠心肌纤维化的主要原因。TGF—B参与了心肌纤维化发生的早期过程。糖原沉积和心肌型aetin表达减少是糖尿病心肌病病理基础。【关键词】糖尿病心肌病变；免疫组织化学；透射电镜；胶原蛋白；心肌型肌动蛋白转化生长因子B细胞学病变和心肌细胞间质纤维沉积及纤维化是临床上一抗；⑦滴加生物素化兔抗小鼠Ig

3、C；⑧滴加试剂SABC；⑨DAB引起心肌舒张功能受损及糖尿病心肌病的一种重要因素。间显色；⑩苏木素轻度复染。脱水，透明。封片。质性胶原基质围绕在心肌细胞的周围。以支持心肌细胞的正1．2-3采用显微图像分析仪进行CollagenI、CollagenIII、常结构及冠脉的微循环结构与功能的完整性。除此之外。间TGF—B和心肌型一aetin蛋白积分光密度分析，计算平均积质性胶原还决定着心室舒张功能及心室体积的大小。协调由分光密度。心肌细胞产生的收缩力向心室腔中的传导⋯。因此。心脏中1．2．4光镜标本的制备石蜡包埋心肌标本切片。切片厚的间质性胶原基质蛋白成分的降解或胶原成分过

4、度的产生。4m，做心肌胶原NASSON染色。都将破坏心肌的力学性质、心室的结构与功能。研究资料表1．2．5透射电镜标本的制备：心肌标本用锇酸固定，PBS洗5明，心肌病变时心肌细胞骨架蛋白发生了异常表达。但糖rainX4，酒精梯度脱水，丙酮梯度脱水。氧树脂浸透包埋。温箱尿病心肌病细胞骨架蛋白病理性表达尚有不同的观点。聚合，超薄切片(7Onn1)。1材料和方法1．3统计学处理所有测试数据以均值±标准差(±s)表1．1动物体质量250—300g大鼠36只，其中18只健康大示。经SPSS11．0计算机数理系统软件。进行单因素方差分鼠。18只为糖尿病大鼠。随机分为6组：糖尿病大

5、鼠1个月析。以P<0．05为差异有统计学意义。组(DM1)、3个月组(DM3)、6个月组(DM6)和健康大鼠12结果个月组(C1)、3个月组(c3)、6个月组(C6)。每组大鼠各62．1实验性糖尿病大鼠心肌胶原总含量健康大鼠合并为只随机筛选人实验。各组分别于1个月、3个月和6个月切c组，发病1个月后心肌胶原总含量明显增加，与健康大鼠组取左心室4mm厚组织2块，将一份标本立即放入冻存管中，比较差异有统计学意义(P<0．05)。6个月组心肌胶原总含放入液氮中保存，待测心肌羟氨酸含量；一份标本于4℃的量明显高于病程3个月以内组(P<0．O1)。见表1。10％福尔马林溶液中固

6、定24h，石蜡包埋，待测心肌细胞内胶表1大鼠心肌羟脯氨酸及胶原总含量的原蛋白和转化生长因子B及肌动蛋白含量。变化(±s，~9／m9心肌)1．2方法1．2．1测定心肌胶原总含量称取冰冻左心室心肌组织100mg，网搓匀浆后将组织粉末置于6M的HCL液2ml中125℃酸解5h，用6ml的NaOH液滴定至pH为7，然后2000r／rain离心10rain，取上清液1ml加柠檬酸缓冲液0．5ml、注：DM组与对照组比较，‘P<0．05，P<0．O1；DM6组与DM10．05M氯胺T1ml，混匀氧化6rain；加3．15ml的过氯酸1组、DM3组比较，。P<0．01ml，混匀放置

7、5rain，再加10％对二氨苯甲醛1ml，8O℃水浴中2．2胶原蛋白和和转化生长因子及心肌型肌动蛋白表达放置6rain，取出后冰水浴中放置30rain，uV一1206型分光光糖尿病程1个月后III型胶原蛋白表达明显增加，3个月达到度计560nnl处比色测定。同时用1—10g的羟脯氨酸标准高峰。3个月之后I型胶原蛋白表达伴随TGF—B。的表达明品按上述相同步骤制作标准曲线。对照标准曲线，求得羟脯显增加。6个月后TGF．B的表达减少略下降，病程1个月内氨酸含量，然后换算成每克心肌组织中羟脯氨酸含量，再乘以心肌细胞心肌型一aetin蛋白表达减少，但同健康鼠