细茎石斛多糖dmp4a—1的结构特性和免疫活性研究

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1、Y‘776332洳≥：j～睦硕士学位论文⑧论文题目绁茎虿魁墨趋墅丛丛塑二!的结捡挂世塑鱼瘗活：眭婴究作者姓名睦堕龌指导教师韭丝睦亟建浙江大学硕士论文2005引言石斛属(DendrobiumSw．)是兰科的第二大属，全世界约有1500～1600种，我国也有近80多种石斛属植物，其中有50多种作为常用中药入药。石斛属植物具有生津养胃、清音明目、消炎止痛、增强机体免疫力等功能，为我国传统重要中药材原料。临床常用于治疗肺虚、胃虚、脾虚等引起的内科疾病和眼科疾病。近几年来国内外的药学研究者还陆续发现一些其他更为重要的药用价值，如抗癌作用等。据《本草纲目》所载，石

2、斛具有主治五脏虚劳赢瘦、强阴益精、久服厚肠胃、定志除惊、轻身延年、健阳、补肾益力、壮筋骨等功效，常用于清胃生津。其主要成分石斛碱则具止痛、解痉作用，可降低心率、血压、减慢呼吸，可产生中度的高血糖，具强壮作用并可解巴比妥中毒。在中药现代化背景下，为了寻找石斛中的有效成分，近年来对石斛小分子化合物研究较多，如其中石斛碱是石斛的重要有效成分，其含量可达1％以上。自从1932年Suzuki等从金钗石斛中首次分离到石斛碱，迄今，世界各国学者已从近30种石斛属植物中分离出100多个化合物。然而另一方面，作为主要成分石斛多糖则文献报道较少，这是由于糖链的结构远较蛋白

3、质复杂，研究更为困难(例如6种结构不同的单糖就可形成108种异构体)，同时由于多糖组成复杂，其分离纯化和结构鉴定较为困难，以致很多药理试验采用多糖粗品为实验材料，这极大地影响了多糖构效关系研究的进程，导致多糖的高级结构与生物活性的关系至今还不十分清楚。目前的研究结果一般认为多糖的活性与其主链一级结构、侧链结构、所带电荷以及组成单糖上的取代基和取代位置以至分子大小、溶解性能有关，其中，多糖分子的立体构型可能是决定多糖活性的决定性因素。因此，深入研究多糖的高级结构，可以从分子水平揭示许多目前尚不能解释的生物活性机制。本文首次以细茎石斛为材料，旨在利用生物大

4、分子研究的近代最新技术和现代分离、分析手段与免疫学实验方法，研究探讨细茎石斛多糖DMP4a一1的组成特征和结构特性，并尝试揭示多糖的高级结构与其重要生物活性的关系，探索可借鉴的方法。同时为进一步研究不同石斛的多糖结构以及免疫活性的分子机制提供实验依据和理论基础。浙江大学硕士论文2005摘要石斛为名贵中草药，石斛多糖是其主要的有效成分。本文以药用石斛之一的细茎石斛为材料，以从其茎断提取的多糖成分DMP4a--1为研究对象，对其结构特性作了进一步的分析；同时主要以巨噬细胞为模型研究了细茎石斛多糖DMP4a--1的免疫调节活性，主要实验结果如下：细茎石斛酸性

5、多糖DMP4a--1为灰黄色絮状固体，紫外分析推测其为蛋白多糖；经高效液相凝胶渗透色谱分析，根据标准曲线测得其分子量Mw3049；用其三甲基硅醚衍生物进行气相色谱分析主要由葡萄糖，甘露糖，鼠李糖，阿拉伯糖和半乳糖组成，其分子摩尔比为：2．873：2．850：1．762：1．279：1；红外光谱图中895cm．1的吸收峰显示该多糖为B—D毗喃糖；高碘酸氧化分析表明糖链结构中存在1—4，1—3及1—6糖苷键其摩尔数比为1．194：2．430：1。由以上结果表明细茎石斛多糖DMP4a--1结构特性较为复杂，是一种B(1—3)一D吡喃杂多糖。细茎石斛酸性多糖D

6、MP4a--1作用于对数生长期的巨噬细胞RAW264。7后，用双抗夹心ELISA法检测细胞培养上清中的TNFa浓度，发现细胞迅速分泌TNFn，随刺激时间的延长，TNFⅡ量亦明显增加(P

7、一1激活RAW264．7促使TNFⅡmRNA表达上调，可能是TNFa分泌量增加的直接原因。另外，由MTT的改良试剂CCK--8检测实验袁明DMP4a-1在体外培养条件下可显著促进脾淋巴细胞的增殖(P

8、nstituentfromPendrobfumplant．Pendrobiummonilifo