石斛多糖增强免疫作用试验研究

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1、石斛多糖增强免疫作用试验研究摘要:研究了石斛多糖增强免疫作用,将健康昆明种小鼠随机分成两组:I组(石斛多糖组),II组(对照组),分别用石斛多糖提取物和蒸憎水饲喂小鼠3周,采血进行小鼠淋巴细胞转化和E玫瑰花环试验,并检测其淋巴细胞转化率、E玫瑰花环形成率和脾脏莹量。结果:淋巴细胞转化(平均数土标准差):I组:83.44±4.126,II组:70.75+2.712,差异显著;E玫瑰花环形成(平均数土标准差):I组:39.0±4.0,II组:13.6±2.4,差异显著;脾脏重量:I组:2.2924±0.

2、8980g,II组:1.9171±0.4011g,差异显著。结果表明石斛多糖能显著提高小鼠淋巴细胞转化率、E玫瑰花环形成率和脾脏重量。说明石斛多糖具有一定的增强免疫作用。关键词:石斛多糖;淋巴细胞转化率;E玫瑰花环试验1•前舌1.1石斛简介石斛属(Dsidfobiiim)系兰科第二大属,多年生草本植物。全球计有1500种。除个别种外,皆屈附生兰类。1980年以前,我国仅发现了57种石斛属植物,后来调查发现并定名的19种石斛属植物丰富了我国石斛的种质资源库,现共有76种。我国石斛的种类仅占全世界的5%

3、左右,但在历史上,其药用开发和利用走在世界前列,是重要的常用屮药材。日前供作药用的石斛属植物39种山。石斛为传统中药,应用历史悠久,药理功效显著⑵。石斛植株中的主要活性成分为多糖,另外还含有生物碱和氨基酸等成分,具有增强免疫力、抗肿瘤、抗疲劳、降血糖、解热等多种药理作用⑶。现代临床应用和药理研究证实,石斛具有滋阴润肺、养胃生津等功效,对慢性疲劳综合征、糖丿求病、肾病有确切疗效和调理康复作用。还有增强机体免疫力、抗氧化、抗衰老的作用⑷。对口干舌燥、年老体弱力衰阴虚等康复有特殊疗效⑸。药用石斛的种类很多

4、,我国约有30多种,主耍分布于西南、华南、台湾等热带、亚热带和秦岭以南各区。化学成分分析发现,药用石斛所含的化学成分类型多样,各类成分的化学结构乂各不相同,药理作用也存在较人差界⑹。1.2石斛多糖的研究现状石斛多糖可作为免疫增强剂,对免疫抑制剂造成的免疫低下有明显的保护作用⑺。因而,对临床肿瘤放、化疗患者及各种原因造成的免疫低下患者可以起到很有效的辅助治疗作用。现代研究表明,石斛多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、促进消化液分泌、降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老和退热止痛等药理作用凶。是一种具有良好开发前

5、景的免疫调节剂,通过对石斛多糖药理作用的研究,为开发利用有药用价值的天然产物提供参考,并可为其它多糖的药效学的研究提供一定的理论依据。石斛多糖具有多种药理作用,具有非常广阔的开发询景,但由于提取纯度不高,纯化成木大等问题,得到的仅是一些粗制品。另外,石斛多糖的结构与生物活性的关系还不是十分清楚,以及石斛多糖的药理作用研究还不是很透彻,因此,这些问题是以后研究中迫切需要解决的。本研究主要是通过构建动物模型,对石斛多糖的免疫增强作用进行研究,以期获得石斛多糖增强机体免疫力的理论依据,为石斛的开发利用奠延

6、理论基础。2.材料与方法2.1试验材料昆明种小鼠购于昆明医科人学实验动物中心,实验兔购于蒙自市农贸市场,石斛多糖由红河学院牛命科学与技术学院动物免疫实验室提取。2.2试验仪器台式离心机,电了天平,分光光度计721型,超净工作台,高压蒸汽灭菌锅;隔水式恒温电热培养箱,显微镜。2.3主要试剂柠檬酸钠,氯化钠,氢氧化钠,氯化钾,磷酸氢二钠,磷酸二氢钾,碳酸钠,氯仿,葡萄糖,甲醇,氯化钱,碳酸氢钠,肝素,植物血凝素PHA,淋巴细胞分离液,胎牛血清,RPMI-1640培养液,瑞氏粉,姬姆萨氏粉,酚红,均为分析

7、纯试剂或优级纯试剂。2.4试验方法241动物模型的建立选择健康昆明种小鼠17只,随机分成2组,试验组9只(5雄4雌),对照组8只(雌雄齐半),分别饲喂石斛多糖水溶液、蒸憾水。242饲喂方法小鼠先按常规方法饲喂一周,使其适应环境,减少应激反应带來的不便和实验课差。石斛多糖组:侮天准确称取铁皮石斛多糖200mg,每只20mg,样品用开水溶解,然后转移至自动饮水瓶屮,小鼠每天早上禁水4小时,屮午再喂给样品溶液,连续饲喂3周。蒸纟留水组(作为对照组):每天供给足量的蒸憾水和饲料,连续饲喂3周。配制的剂屋为每

8、天lOOnil,每只每天饮用10ml,各组小鼠试验过程中,正常供给饲料。2.4.3采取小鼠尾血试验第22天,对每只小鼠采取尾血,先单手固定好小鼠,再用酒和棉球对小鼠尾部进行消毒,然斤用经过高温消毒的手术剪剪去一段尾巴,另一只手从尾根部到断尾处来回挤压,使血液渗出,用1.5ml的Eppendorf管保存,每只小鼠采集0.5ml左右的血液,每采一只就作一标记,以免混淆。2.4.4淋巴细胞转化试验取盛有2.5mlRPMI-1640营养液的培养小瓶,加入PHA,最终含量为50

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