医药学药学毕业论文 基质金属蛋白酶-2与胃癌的侵袭转移

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学药学论文题目：基质金属蛋白酶-2与胃癌的侵袭转移指导老师：XXX二〇一一年十二月十日　　细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节，需借助于蛋白降解酶的表达和激活。基质蛋白酶主要有以下数种：丝氨酸蛋白酶类，包括血浆酶原激活剂；半胱氨酸蛋白酶类，包括组织蛋白酶D在内的溶酶体酶；金属蛋白酶类(metalloproteinases)［1］。金属蛋白酶类在肿瘤侵袭过程中的作用近年来倍受关注，大量证据表明基质金属蛋白酶，特别是基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloprot

2、einase-2，MMP-2)在肿瘤细胞介导的细胞外基质降解中起关键作用，临床研究表明，MMP-2活性和表达的增加与人类多种恶性肿瘤侵袭转移潜能及预后密切相关［2～4］。　　一.MMP-2基因及其表达和激活的调节　　MMP-2基因位于人类染色体16q21，由13个外显子和12个内含子所组成，结构基因总长度为27kb，与其他金属蛋白酶不同，MMP-2基因5′旁侧序列促进子区域含有2个GC盒而不是TATA盒［5］。MMP-2以前酶原的形式由多种细胞分泌，如成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞和恶性肿瘤细胞等。与其他金属蛋白酶相似，MMP-2分子含有氨基末端片段、金

3、属结合片段及羧基末端片段，其中带有高度保守序列PRCGV/NPD的氨基末端具有一个不配对的半胱氨酸残基，该残基与激活位点的锌原子相互作用介导着MMP-2的前体状态；金属结合片段是公认的锌结合部位，其含旁侧有2个组氨酸的保守序列HE-GH；羧基末端具有类似凝血酶的片段，该片段的具体功能尚未明确。此外，MMP-2还具有一个58个氨基酸残基组成的明胶结合片段，此片段与纤维连接素的明胶结合Ⅱ型基元相似［6］。目前认为，MMP-2表达和功能的调节发生于转录、分泌、前酶原的激活、细胞表面的结合以及与来源于肿瘤或宿主细胞的MMP抑制剂的相互作用等多个不同的水平。　　M

4、MP-2的转录调节与其他金属蛋白酶相比具有一定的独特性，如佛波醇酯(phorbolester)通过AP-1位点的介导增加MMP-9和间质胶原酶的表达，而MMP-2基因促进子区域未能测得AP-1位点［5］；转化生长因子-β1(TGF-β1)通过其抑制元素TIE抑制间质胶原酶的表达［7］，而TGF-β1却能诱导人类细胞株转录出高水平的MMP-2信使核糖核酸(mRNA)［8］。此外，整合素受体和TN(Tenascin)亦能诱导MMP-2的转录表达。MMP-2在细胞外以前酶原的状态存在，体外实验表明有机汞化合物和蛋白酶等均可通过干扰氨基末端不配对半胱氨酸残基与激

5、活位点的锌原子间的相互作用，导致前酶原氨基末端80个氨基酸片段的自身催化降解转化成酶原，获得胶原溶解的活性，激活的酶原进行自身蛋白降解，最终产生具有稳定活性62KD酶，这种激活过程被称为“半胱氨酸开关(cysteineswitch)”假说［9］。　　由于膜型MMP即MT1-MMP的成功克隆和排序，MMP-2在体内激活的受体机制已被基本阐明。将MT1-MMP质粒转染入Cos-1细胞株内后，MT1-MMP即表达于该细胞株的胞膜，并导致MMP-2酶原的特异性激活［10］。研究发现，MMP-2酶原的激活依赖于由TIMP-2(tissueinhibitorofme

6、talloproteinase-2)与MT1-MMP结合始动的一个三元复合体的形式，虽然高浓度的TIMP-2抑制MMP-2的活性［11］。　　MMPS活性调节的关键是TIMPS对其酶活性的抑制作用。研究表明MMP-2及其前体均可与TIMP-2结合，但结合位点并不相同。MMP-2前体-TIMP-2复合体在不裂解的情况下仍可被继续激活产生MMP-2活性，该活性能被额外的TIMP-2完全抑制［12］。所以MMP-2与TIMP-2的相对浓度最终决定MMP-2胶原降解的能力。MMP-2的主要底物为Ⅳ型胶原，其次还有Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ型胶原及纤维连接素和弹性蛋白等。　　

7、二.MMP-2与恶性肿瘤的侵袭转移　　体外实验结果显示，ras基因诱导的恶性肿瘤细胞株的MMP-2表达增加，激活MMP-2的单克隆抗体能促进A2058细胞株的侵袭能力，而抑制MMP-2的单抗则使A2058细胞株穿透重组基底膜的能力明显减弱［13］。TIMP-2对肿瘤侵袭转移的抑制是MMP-2与肿瘤侵袭转移相关性的又一佐证。TIMP-2过度表达，能抑制转移性ras转化小鼠胚胎成纤维细胞裸鼠静脉注射后肺转移灶的形成，以及体内肿瘤的生长速度和癌细胞的浸润特性［14］。Vaisanene认为［15］MMP-2表达是皮肤黑色素瘤的独立预后因素；Levy［16］采用

8、Northern印迹分析技术发现72%的直、结肠腺癌MMP-2mRNA水平异常增