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时间:2018-09-04
《RASSF1A基因表达对肝癌细胞化疗药物敏感性的影响.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、RASSF1A基因表达对肝癌细胞化疗药物敏感性的影响作者:芮理,薛万江,李鹏,王鹏,王志伟,李厚祥【摘要】 目的:研究RASSF1A提高肝癌细胞化疗药物敏感性的作用。方法:通过脂质体介导的基因转染法将RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染肝癌细胞株QGY-7703,G418筛选稳定表达株,并以RT-PCR和WesternBlot进行鉴定目的基因的表达。化疗药物阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、鬼臼乙叉甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)分别作用各细胞株后,检测各细
2、胞株的生长抑制率。结果:经800μg/ml的G418最佳筛选浓度筛选QGY-7703细胞株,成功建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。以QGY-7703细胞为对照,MMC对表达RASSF1A基因的肝癌细胞的生长抑制率最大为21%。结论:RASSF1A基因的表达可明显提高肝癌细胞对MMC的敏感性。RASSF1A的表达不影响肝癌细胞QGY-7703对ADM、VP-16、5-FU和DDP敏感性。【关键词】肝细胞癌Rasassociationdomainfamily1A药物敏感性逆转录聚合酶链反应
3、 [Abstract]Objective:ToinvestigatetheeffectsofRASSF1Ageneexpressiononthechemosensitivityofhumanhepatocellularcarcinomacell(HCC).Methods:RASSF1AexpressionvectorandemptyvectorweretransfectedintoHCCcelllineQGY-7703withLipofectamine2000reagents.Thepositiv
4、eclonesthatexpressedRASSF1AgenestablywerechosenbyG418andcheckedbyRT-PCRandWesternBlot.Cellinhibitedrate(IR)wasmeasuredafterthetreatmentwiththeantitumoragentsADM,MMC,VP-16,5-FUandDDP.Results:TheHCCcelllinesthatreexpressedRASSF1Agenestablywereestablishe
5、dsuccessfully.ThesuitableconcentrationofG418usedforselectionagentwas800μg/mlforQGY-7703cellline.AfterbeingtreatedwithMMC,theIRofcellsreexpressingRASSF1Awasmaximal,anditwas21%,usingQGY-7703cellascontrol.Conclusion: TheexpressionofRASSF1Acouldincreaseth
6、ecellIRinducedbyMMC.RASSF1AgeneexpressionhadnoeffectonthechemosensitivityofhumanhepatocellularcarcinomacelltreatedwithADM,VP-16,5-FUandDDP. [Keywords]Hepatocellularcarcinoma;Rasassociationdomainfamily1A;Drug-sensitivity;Rerversetranscriptasepolymeras
7、echainreactionRASSF1A(rasassociationdomainfamily1A)基因是近年来发现的一个重要的抑癌基因,其抑制肺癌、肾癌、膀胱癌细胞生长的功能已得到证实[1~3]。通过瞬时转染发现,RASSF1A基因的表达使肺癌细胞株NCI-H1299生长阻止在G1/S期与抑制细胞周期蛋白cyclin4D1的表达累积有关[4,5]。但对于RASS-F1A基因的表达对化疗药物敏感性的研究国内外尚未见报道,本研究通过建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株,观察RASSF1A基因
8、表达对肝癌细胞化疗药物敏感性的影响。 1材料和方法 1.1质粒、细胞株及主要试剂pcDNA3.1(+)RASSF1A质粒由美国Pfeifer博士惠赠[1]。真核表达载体pcDNA3.1(+)购自Invitrogen公司,肝癌细胞株QGY-7703由国家人类基因组南方研究中心常规保存,用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。所有细胞均在37.0℃、5%CO2及饱和湿度的培养箱内培养。脂质体Lipofectamine2000、G418、TrizolRNA抽提试剂、二抗羊抗鼠IgG-
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