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时间:2018-09-03
《小檗碱抗肿瘤活性筛选及作用机制研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、学校代码59^IMK^学号或巾请号201522283305m/7密级鄞W土f专业硕士学位论文小檗碱抗肿瘤活性筛选及作用机制研究作者姓名:张创导师姓名:张雁冰教授专业学位名称:药学颂士培养院系:药学院2018完成时间:年4月摘要摘要小檗碱具有一定的抗肿瘤活性,先利用基因芯片测定小檗碱的基因表达谱数据,然后与CMap数据库作对比,预测小檗碱抗肿瘤的作用机制,再利用CCK-8法确定研究小檗碱抗肿瘤作用机制时所使用的肿瘤细胞。方法:首先用小檗碱处理MCF-7人乳腺癌细胞抽提出的RNA做基因芯片测定了小檗碱的基因表达谱数
2、据,其中芯片类型为AffymetrixHumanGenomeU133A2.0。通过小檗碱的基因表达谱数据与CMap数据库的对比,预测小檗碱可作为一种Hsp90抑制剂,也可作为一种HDAC抑制剂,或者可通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进肿瘤细胞的凋亡。然后通过CCK-8法测定小檗碱对几种实验室常用的肿瘤细胞的抑制活性,其中对SW480人结肠癌细胞的抑制活性最好,因此后续的验证实验选择SW480细胞。然后通过流式细胞仪检测了小檗碱对SW480细胞的凋亡、线粒体膜电位以及周期的影响。又通过Cellularthermalshift检测在SW480细胞中,小檗碱是否与
3、Hsp90蛋白结合,通过Westernblot检测小檗碱是否影响Hsp90客户蛋白的表达,部分在结肠癌中高表达的HDAC的几个亚型以及PI3K/AKT/mTOR通路各蛋白的表达。最后通过CCK-8法及协同指数的计算分析了小檗碱和17-AAG(一种Hsp90抑制剂)或SAHA(一种选择性HDAC抑制剂)在SW480细胞中联合使用或者三者联合使用是否具有协同作用。结果:在检测的几种实验室常用的肿瘤细胞中,小檗碱对SW480人结肠癌细胞的抗肿瘤活性最好,其IC50为3.436±0.193µM。小檗碱可以促进SW480细胞通过线粒体凋亡途径发生凋亡,另外,在SW480细胞中
4、,小檗碱可以抑制PI3K/AKT/mTOR通路,并因此促进SW480细胞发生细胞自噬,阻滞SW480细胞的细胞周期在G1期。小檗碱与17-AAG或SAHA在SW480细胞中联合使用,均具有一定的协同作用。三者联合使用,也有一定的协同作用,并且协同作用更明显。另外由于在之前的一些报道中提到在一些肿瘤细胞中,Notch1通路的过表达可以负调控PTEN蛋白进而活化PI3K/AKT/mTOR通路,因此,我们还研究了小檗碱是否能够影响SW480细胞中的Notch1通路以及PTEN蛋白的表达。I摘要方法:我们利用Westernblot检测了经小檗碱处理后的SW480细胞中Not
5、ch1通路上各蛋白以及PTEN蛋白的表达。结果:小檗碱在SW480细胞中可以抑制Notch1通路上Jagged1,Notch1,NICD,Hes-1各蛋白的表达,即可以抑制Notch1通路的活性,因此推测小檗碱可能通过抑制Notch1通路的活性上调PTEN蛋白的表达从而抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进SW480细胞的凋亡。结论:1.小檗碱在SW480细胞中可以抑制PI3K/AKT/mTOR通路,并因此通过线粒体凋亡途径促进SW480细胞的凋亡,还可以促进SW480细胞发生细胞自噬,阻滞SW480细胞周期在G1期。2.在SW480细胞中,小檗碱与Hsp90抑制剂
6、或HDAC抑制剂联合使用均具有协同作用,三者联合使用也具有协同作用,且协同作用的效果更明显。3.小檗碱在SW480细胞中可以抑制Notch1通路,并可能因此上调PTEN蛋白的表达抑制PI3K/AKT/mTOR通路。关键词:小檗碱CMapPI3K/AKT/mTOR通路Notch1通路IIAbstractAbstractThemechanismthatberberinepromotestheapoptosisofcoloncancercellswasfoundbycomparingwithCMap.Berberinehascertainanti-tumoractivit
7、y.BycomparingthegeneexpressionprofiledataofberberineandCMapdatabase,themechanismofberberineagainsttumorwaspredicted.ThenCCK-8wasusedtodeterminethetumorcellsusedtovalidatetheanti-tumormechanismofberberine.Methods:First,theRNAofMCF-7Humanbreastcancercellswastreatedwithberberinetomaketh
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