大鼠急性肾缺血再灌注对细胞内钙水平与细胞凋亡的影响.doc

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1、大鼠急性肾缺血再灌注对细胞内钙水平与细胞凋亡的影响【摘要】目的：观察缺血再灌注损伤对肾细胞游离钙（〔Ca2+〕i）水平和细胞凋亡的影响。方法：采用摘除大鼠左肾，钳夹右侧肾蒂的方法，建立急性缺血再灌注肾损伤模型，应用Fura-2/AM荧光指示剂测定缺血再灌注大鼠肾细胞〔Ca2+〕i水平，流式细胞术检测肾细胞凋亡率。结果：缺血再灌注不同时期肾细胞呈现不同程度Ca2+超载，与对照组相比差异显著（P<0.01）；肾细胞凋亡率与对照组相比差异显著（P<0.05）。结论：缺血再灌注不同时期肾细胞呈

2、现Ca2+超载现象并与肾细胞凋亡率有正相关趋势，再灌注时间与肾细胞Ca2+超载呈正相关，提示再灌注损伤在加重细胞钙超载同时增加了肾组织细胞凋亡，可能是再灌注损伤肾功能障碍的重要原因。【关键词】缺血再灌注；肾组织；细胞钙超载；细胞凋亡〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofrenalischemicreperfusioninjuryontracellularinonizedcalciumlevelandapoptosis.MethodsThemodelofrat's

3、acuterenalischemicreperfusioninjurywasestablished.Renalintracellular〔Ca2+〕ilevelwasdeterminedbyFura-2/AMfluorescenceassay,andrenalcellapoptosiswasmeasuredbyflowcytometry.ResultsComparedwithcontrolgroup,renalintracellular〔Ca2+〕ilevelincreasedsignifican

4、tly(P<0.01)andapoptosisrateincreasedsignificantly(P<0.05)atdifferentperiodofischemicreperfusion.ConclusionAtdifferentperiodofrat'sacuterenalischemicreperfusioninjury,renalintracellular〔Ca2+〕ioverloadingandtherateofapoptosiswererelevant.Reperfusi

5、ontimeandrenalintracellular〔Ca2+〕ioverloadingwererelevant,whichsuggestedthatthereperfusioninjurymightaggregateoverloadofintracellular〔Ca2+〕ibydifferentmechanisms.肾缺血再灌注损伤综合征是公认的移植肾重要的致病因子，不但与移植肾功能延迟恢复的发生密切相关，而且也与肾移植术后急性和慢性排斥反应的发生和进展密切相关[1]。肾缺血再灌注损伤的发生

6、机制，涉及诸多因素，其中细胞内钙代谢紊乱占有相当重要的位置，可能与急性缺血缺氧造成细胞内信号传导障碍及细胞膜性结构改变有关。另外，急性缺血缺氧会引起细胞的急慢性损伤、死亡和细胞凋亡。细胞内游离钙（Ca2+）是介导细胞生理与病理作用的重要信使，其浓度异常升高会引起细胞的急慢性损伤和死亡，还可引起组织细胞的氧化侵袭。因此，本实验拟就缺血再灌注不同时期肾细胞内钙含量（〔Ca2+〕i）和肾细胞凋亡水平进行研究，为探讨缺血再灌注损伤的发生机制提供实验依据。1材料与方法51.1实验动物及主要试剂1.1.1动物

7、分组实验动物系白求恩医科大学实验动物部提供，为封闭群动物。取雄性（避免雌激素对缺血的调节作用）Wistar大鼠30只，体重200~250g。随机分为假手术对照组（Ⅰ组）、缺血1h组（Ⅱ组）、再灌注1h组（Ⅲ组）、再灌注2h组（Ⅳ组）和再灌注24h组（Ⅴ组）。1.1.2试剂Fura-2/AM购自Calbiochem公司。1.2实验方法1.2.1手术方法及取材将Wistar大鼠在20%乌拉坦（按1g·kg-1，iv）麻醉下进行手术。腹中线切口，左肾静脉穿刺取血，摘除左肾，以避免健侧的代偿作用。Ⅰ组：单

8、纯切除左肾，分离右肾动脉、静脉，不夹闭右肾动静脉，作为假手术对照组；Ⅱ组：夹闭右肾动静脉1h，取右肾作为再灌注损伤阴性对照组。夹闭肾动静脉1h去除动静脉夹，静脉补给生理盐水20mL。恢复血流再灌注1h（Ⅲ组）；2h（Ⅳ组）和24h（Ⅴ组）取右肾，同时留取血液做肾功能检测。肾上极组织做光镜和电镜检查，其余肾组织按实验要求处理。1.2.2肾细胞游离钙浓度（〔Ca2+〕i）测定用荧光标记探针Fura-2/AM标记Ca2+，荧光分光光度仪（日本，F4010型）检测[2]。1.2.3细胞凋亡