Cne PRP8蛋白质内含子的剪接

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1、校代码：10255作者学号：2150460硕士学位论文CnePRP8蛋白质内含子的剪接THEPROTEINSPLICINGOFCnePRP8INTEIN学科专业：生物化学与分子生物学作者姓名：李淑梦指导教师：孟清教授答辩日期：2018年01月18日CnePRP8蛋白质内含子的剪接东华大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结

2、果由本人承担。学位论文作者签名：日期：2018年1月18日2CnePRP8蛋白质内含子的剪接东华大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权东华大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：日期：2018年1月18日日期：2018年1月18日3CnePRP8蛋白质内含子的剪接CnePRP8蛋白质内含

3、子的剪接摘要蛋白质内含子（intein）是存在于前体蛋白质中的一段多肽序列，它可以介导蛋白质的剪接（proteinsplicing）作用，这个过程是它通过自身的催化作用从前体蛋白质中剪切下来，并且它两侧的蛋白质外显子之间通过新形成的肽键连接起来形成了成熟的蛋白质。蛋白质内含子介导的蛋白质剪接为蛋白质工程的发展注入了无限的新希望。但是蛋白质内含子作为蛋白质工程中应用的工具，其剪接效率较低大大影响了它的广泛应用，大部分的天然的蛋白质内含子的剪接效率很低，将其应用到其他方面，尤其是插入到宿主蛋白中，几乎失去剪接活性，所以蛋白质内含子的这个特性也限制了其在蛋白质工程中的广泛应用。并且到

4、目前为此蛋白质剪接机理仍然是个谜，因而它极大地制约了蛋白质内含子及其介导的蛋白质剪接在蛋白质工程领域的广泛应用。本课题以通过“随机突变-功能选择-定向进化”获得的来自于真核生物核基因组中的蛋白质内含子CnePRP8为研究对象，CnePRP8蛋白质内含子在定向进化之后剪接效率大大提高，且它的关键剪接位点没有突变，它的内部发生了几个关键位点的突变，本课题通过对进化后的蛋白质内含子CnePRP8关键部位氨基酸进行突变、恢复突变，对相邻剪接位点蛋白质外显子氨基酸的突变研究,试图揭示蛋白质剪接新机理。研究结果表明，真核生物蛋白质内含子的剪接仍然与其1位和正1位相关，但是对于CnePRP8

5、蛋白质内含子，其剪接效率还与其52位、68位、114位和146位的氨基酸突变有关，其氨基酸的突变改变了剪接活性中心的空间构象，从而影响了蛋白质内含子的剪接。这一研究不仅巩固了蛋白质内含子剪接机理，也揭示出蛋白质内含子在真核生物中的进化途径，但仍需进一步的探索与研究。关键词：蛋白质内含子；蛋白质剪接；蛋白质剪接机理4CnePRP8蛋白质内含子的剪接THEPROTEINSPLICINGOFCnePRP8INTEINABSTRACTInteinshavebeendefinedasproteinsequencesembeddedin-framewithinaprecursorprote

6、inequenceandexcisedduringamaturationprocesstermedproteinsplicing.Intein-mediatedproteinsplicingoffersmanypromisesinproteinengineering.Howeverthemechanismsofproteinsplicingisstillunclear,whichgreatlylimitsthegeneralapplicationofproteinsplicinginproteinengineering.ThisprojectstudiesCnePRP8inte

7、inthatwasfromaeukaryoticgenomeandhadbeenimprovedthroughdirectedevolutionconsistingofrandommutagenesisfollowedwithfunctionalselection.ThisimprovedCnePRP8inteinwillbesubjectedtosite-specificmutationsofaminoacidresiduesatcriticallocations,followedwith