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1、金银花对发热新西兰兔解热作用机制的研究作者：谢新华蒋绍祖邹晓琴周琴温二生薛进华【摘要】目的探讨金银花解热作用的中枢机制,为其在临床应用提供实验依据。方法用白细胞介素-1β复制新西兰兔发热模型,在观察金银花解热作用的基础上,应用免疫组化技术检测静脉注射金银花对IL-1β作用下新西兰兔视前区-下丘脑前部(preopticanteriorhypothalamus,POAH)组织中前列腺素受体EP3表达的影响。结果金银花静脉注射后对正常新西兰兔结肠温度没有明显影响,与生理盐水组相比,最大体温上升高度(△T)及1h体温反应指数(TRI1)两组间无统计学意义(P>)
2、；IL-1β组在静脉注射IL-1β后,结肠温度逐渐升高,△T及TRI1与生理盐水组比较,有统计学意义(P【关键词】金银花解热视前区下丘脑前部前列腺素受体EP3金银花是我国中医药宝库中的瑰宝,其成分复杂，含多种挥发油、绿原酸类化合物、三萜皂苷类化合物、黄酮类化合物。具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、降脂、抗生育、止血、抗溃疡等多种药理作用［1］。以金银花为主的多种复方制剂对多种感染所致的发热有较好的疗效。我们以往的实验也表明［2］，金银花对IL-1β引起的发热有明显的解热作用，并用电生理方法对其中枢解热机制作了初步研究。本实验从
3、分子生物学角度进一步探讨其中枢解热机制,为其在临床解热中的应用提供更多的实验依据。1器材与方法设备及试剂ST-1型数字温度计,电热恒温培养箱,CM1900型恒冷箱切片机,DMRA2正立电动荧光显微镜,LEicaQwin彩色图像分析系统,IL-1β。金银花注射液。免疫组化试剂盒。动物及分组健康新西兰兔24只,雌雄不限，体重～kg，随机分成4组，每组6只。①生理盐水(NS)对照组：每只动物静脉注射NS1ml；②金银花组：每只动物静脉注射金银花注射液1ml；③IL-1β组：每只动物静脉注射IL-1β100ng；④金银花+IL-1β组：静脉注射金银花注射液1ml
4、/只,0min后再静脉注射IL-1β。发热动物模型的制备使用ST-1型数字温度计测量结肠温度。实验前d将兔置于实验环境中模拟操作以适应实验条件，～h/d，第4天正式实验。实验时，实验室温度保持在℃，将新西兰兔置于特制兔箱中，用涂有石蜡油的测温探头经肛门插入10cm,并用胶布固定于尾根部，待体温稳定后,每隔10min记录1次结肠温度，取3次的平均值作为基础体温。IL-1β组从耳缘静脉注射IL-1β，并每隔10min记录体温1次，共记录70min；NS对照组从耳缘静脉注射NS；实验组记录体温方法相同。取材和切片记录至70min时，用20%氨基甲酸乙酯进行麻醉
5、，迅速分离双侧颈总动脉和一侧颈外静脉，其中一侧颈总动脉插管，另一侧颈总动脉结扎，开放颈外静脉，快速(2min内)输入3℃%肝素生理盐水100ml，再先快后慢灌注℃%多聚甲醛200ml，维持灌注30min；取兔下丘脑，放入4%多聚甲醛后固定，按常规石蜡切片方法，脱水、透明、包埋、切片，厚度为μm，隔2取1，用作EP3免疫组化法检查。飘浮法免疫组化染色程序按常规ABC方法。切片脱蜡、脱水；新鲜配制的3%双氧水浸泡10min，以消除内源性过氧化物酶；抗原修复；正常兔血清孵育30min，滴加抗EP3抗体，4℃过夜；滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃孵育20mi
6、n；滴加试剂SABC，37℃孵育30min；DAB显微镜下控制显色；上述各步之后均用mol/LPBS振荡漂洗3次，每次min；苏木素复染，脱水，透明，封片，显微镜下观察。阴性对照以PBS代替一抗，其余步骤相同。阳性对照采用自身对照，用PBS代替一抗和二抗作阴性对照。图像分析采用LEIcaQwin彩色图像分析系统，每张切片随机选取10个不重叠的视野，计数每个视野阳性细胞数；每个视野随机选10个细胞，计算单个细胞面积及阳性细胞总面积来反映POAH、EP3亚型的表达水平。统计学分析所有实验数据均以±s表示，用进行t检验。结果.1金银花对IL-1β性发热效应的影
7、响结果见表1。从表1可以看出，金银花组和NS组新西兰兔体温没有明显变化，两组比较，△T及TRI1均无明显差异(P>)；而IL-1β组与NS组相比，结肠温度升高，△T及TRI1有显著性差异(P表1各组家兔结肠温度影响的比较与NS组比较，*P.2金银花对发热新西兰兔视前区-下丘脑前部前列腺素受体EP3表达的影响结果见表2。从表2可以看出，NS对照组和金银花组视前区-下丘脑前部每个视野EP3阳性神经元个数、单位面积阳性神经元及阳性细胞面积光密度值差异无统计学意义；IL-1β组新西兰兔POAH每个视野EP3阳性神经元个数、单位面积阳性神经元及阳性细胞面积光密度值
8、均明显高于生理盐水对照组；而注射金银花注射液能抑制IL-1β诱导的EP3表达，其
