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1、金银花对发热新西兰兔解热作用机制的研究作者：谢新华蒋绍祖邹晓琴周琴温二生薛进华【摘要】目的探讨金银花解热作用的中枢机制,为其在临床应用提供实验依据。方法用白细胞介素-1β（IL-1β）复制新西兰兔发热模型,在观察金银花解热作用的基础上,应用免疫组化技术检测静脉注射金银花对IL-1β作用下新西兰兔视前区-下丘脑前部(preopticanteriorhypothalamus,POAH)组织中前列腺素受体EP3（E-typeprostaglandinreceptorEP3）表达的影响。结果金银花静脉注射后对正常新西兰兔结肠温度没有明显影响,与生理盐水组相比,最大体温上升高度(△T)及1h
2、体温反应指数(TRI1)两组间无统计学意义(P>0.05)；IL-1β组在静脉注射IL-1β后,结肠温度逐渐升高,△T及TRI1与生理盐水组比较,有统计学意义(P<0.01)；而金银花+IL-1β组结肠温度上升峰值明显低于IL-1β组,两组△T及TRI1有显著性差异(P<0.05)。新西兰兔POAHEP3在生理状态下仅有少量表达；静脉注射IL-1β诱导实验动物发热时,EP3表达明显增强(P<0.01)；而金银花能减少IL-1β引起的EP3表达(P<0.05)。结论金银花对IL-1β性发热新西兰兔的解热作用机制可能与其抑制视前区-下丘脑前部EP3的表达有
3、关。【关键词】金银花解热视前区下丘脑前部前列腺素受体EP3金银花是我国中医药宝库中的瑰宝,其成分复杂，含多种挥发油、绿原酸类化合物、三萜皂苷类化合物、黄酮类化合物。具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、降脂、抗生育、止血、抗溃疡等多种药理作用［1］。以金银花为主的多种复方制剂（如银翘散、银黄注射液、银黄解毒片等）对多种感染所致的发热有较好的疗效。我们以往的实验也表明［2］，金银花对IL-1β引起的发热有明显的解热作用，并用电生理方法对其中枢解热机制作了初步研究。本实验从分子生物学角度进一步探讨其中枢解热机制,为其在临床解热中的应用提供更多的实验依据。 1器
4、材与方法 1.1设备及试剂ST-1型数字温度计（上海医用仪表厂）,电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械一厂）,CM1900型恒冷箱切片机（德国徕卡公司）,DMRA2正立电动荧光显微镜（德国徕卡公司）,LEicaQa公司）。金银花注射液。免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。 1.2动物及分组健康新西兰兔24只,雌雄不限，体重1.5～2.0kg，随机分成4组，每组6只。①生理盐水(NS)对照组：每只动物静脉注射NS1ml；②金银花组：每只动物静脉注射金银花注射液1ml；③IL-1β组：每只动物静脉注射IL-1β100ng（用无热原NS稀释至1ml）；④金银花+IL-1β组：静
5、脉注射金银花注射液1ml/只,30min后再静脉注射IL-1β（剂量同IL-1β组）。 1.3发热动物模型的制备使用ST-1型数字温度计测量结肠温度。实验前3d将兔置于实验环境中模拟操作以适应实验条件，4～6h/d，第4天正式实验。实验时，实验室温度保持在（23±1）℃，将新西兰兔置于特制兔箱中，用涂有石蜡油的测温探头经肛门插入10cm,并用胶布固定于尾根部，待体温稳定后,每隔10min记录1次结肠温度，取3次的平均值作为基础体温。IL-1β组从耳缘静脉注射IL-1β，并每隔10min记录体温1次，共记录70min；NS对照组从耳缘静脉注射NS；实验组记录体温方法相同。 1.4
6、取材和切片记录至70min时，用20%氨基甲酸乙酯进行麻醉，迅速分离双侧颈总动脉和一侧颈外静脉，其中一侧颈总动脉插管，另一侧颈总动脉结扎，开放颈外静脉，快速(2min内)输入37℃0.01%肝素生理盐水100ml，再先快后慢灌注4℃4%多聚甲醛200ml，维持灌注30min；取兔下丘脑，放入4%多聚甲醛后固定，按常规石蜡切片方法，脱水、透明、包埋、切片，厚度为4μm，隔2取1，用作EP3免疫组化法检查。 1.5飘浮法免疫组化染色程序按常规ABC方法。切片脱蜡、脱水；新鲜配制的3%双氧水浸泡10min，以消除内源性过氧化物酶；抗原修复；正常兔血清孵育30min，滴加抗EP3抗体，4
7、℃过夜；滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃孵育20min；滴加试剂SABC，37℃孵育30min；DAB显微镜下控制显色；上述各步之后均用0.01mol/LPBS振荡漂洗3次，每次5min；苏木素复染，脱水，透明，封片，显微镜下观察。阴性对照以PBS代替一抗，其余步骤相同。阳性对照采用自身对照，用PBS代替一抗和二抗作阴性对照。 1.6图像分析采用LEIcaQ. 2结果 2.1金银花对IL-1β性发热效应的影响结果见表1。从表1可以看出，金银花组和NS组新西兰
