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《集成核酸提取的实时荧光pcr 微全分析系统》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、------------------------------------------------------------------------------------------------集成核酸提取的实时荧光PCR微全分析系统第42卷2014年10月摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇分析化学(FENXIHUAXUE)摇研究报告ChineseJournalofAnalyticalChemistry摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇第10期1393~1399蕥蕥藡蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥藡DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.1403581摇引摇言以及疾病诊断等[1]。微流控芯片在核
2、酸分析方面有着广泛和极其重要的应用,如基因突变检测[2]、病原体基因鉴定[3,4]、SNP(Singlenucleotidepolymorphism)分析[5]等。传统的PCR(Polymerasechainreac鄄tion)技术虽然能实现DNA的扩增检测,但其检测结果受人为因素的影响较大,需要专业技术人员和实核酸作为基本的遗传物质,携带着各种信息,对其结构、功能的认识,有利于研究物种的遗传、进化蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥藡1研究报告(中国科学院安徽光学精密机械研究所,安徽省生物医学光学仪器工程技术研究中心,合肥230031)2赵树弥1摇朱灵1,2摇朱灿灿1摇李阳1摇王华东1摇张龙1
3、,2堵棣威1摇邓国庆1,2摇王安1摇刘勇*1,2(皖江新兴产业技术发展中心,铜陵244000)摘摇要摇集成核酸提取的实时荧光PCR微全分析系统将核酸提取、PCR扩增与实时荧光检测进行整合,在同一块微流控芯片上实现了核酸分析过程的全自动和全封闭,具有试剂用量少、分析速度快、操作简便等优点。本研究采用微机械加工技术制作集成核酸提取微流控芯片的阳极模,使用组合模具法和注塑法制作具有3D通——————————————————————————————————————------------------------------------------------------------
4、------------------------------------道的PDMS基片,与玻璃基底通过等离子体键合封装成集成核酸提取芯片。构建了由微流体速度可调节(0~10mL/min)的驱动控制装置、温控精度可达0.1益的TEC温控平台、CCD检测功能模块等组成的微全分2mL/min的流体驱动速度完成20滋L裂解液上样、清洗;以1mL/min的流体驱动速度完成DNA洗脱,抽取PCR试剂与之混合注入到反应腔。提取的基因组DNA以链上内参基因GAPDH为检测对象,并以传统手工Ct值分别为25.3和26.9。扩增产物进行熔解曲线分析得到的熔解温度一致,均为89.9益。结果表明
5、,此系统能够自动化、全封闭的在微流控芯片上完成核酸提取、PCR扩增与实时定量分析。关键词摇核酸提取;微全分析系统;实时荧光PCR;微流控芯片提取为对照,在该系统平台上进行PCR扩增和熔解曲线分析实验。片上PCR扩增结果显示,扩增曲线明显,析系统。以人类血液裂解液为样品,采用硅胶膜进行芯片上核酸提取。系统根据设置好的时序自动执行,以验室设备,而荧光定量PCR技术和微流控技术的相结合,能实现核酸操作过程的自动化、全封闭,简化了人工的操作过程,避免了过程污染,提高了核酸检测的效率和准确性[6~8]。集成核酸提取功能的实时荧光PCR微全分析系统将样品前处理、PCR扩增与荧光检测功能
6、模块集成,能直接给出分析结果,可实现“样品进鄄结果出冶这一目标。因此,微全分析系统现已成为分析仪器和分析科学发展的重要方向和前沿[9~11]。集成化的微流控芯片通常将微流体控制与分析单元集成在芯片上,如微泵、微阀、微加热器、微混合器、微流量控制器以及微检测器等,使体积微型化和功能集成化,在较短时间内精确完成从样品制备到结果显示的全部——————————————————————————————————————-------------------------------------------------------------------------------------
7、-----------过程[12~14]。尽管大规模集成的微全分析系统还处在实验室研究阶段,但随着微流控芯片的运用与发展[15~17],针对特定功能的微流控芯片及系统发展迅速[18,19],如静态腔式微流控PCR系统[20]、具有样品前处理功能的核酸提取系统[21,22]、集成化的温控系统[23]、微型化的检测系统[24]。目前,由于各功能模块的研究突破,促进了集成化的发展,但形成一个完整的集成化系统还存在着很大的技术难度[25,19]。本实验基于固相萃取法[26],采用硅胶膜提取核酸[27],设计并制作了集成核酸
