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1、GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定作者：梁久红,梁立敏△,董敏,韩振格,董晨,孟继鸿【摘要】 目的:以戊型肝炎病毒（HEV）ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体（mAb）,与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中国株p166的GST或His融合蛋白、中国株非融合重组蛋白p179Chn以及GST融合的HEV无关蛋白进行ELI
2、SA检测,鉴定mAb所识别的抗原表位。结果:获得3株稳定分泌抗p166Chn-GST的杂交瘤细胞株,分泌的mAb1A8、9B4和8H10与p166Chn-GST反应,与GST不反应。其中1A8和9B4可与带GST标签的4种p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反应,而不与4种p166-His蛋白反应,也不与p179Chn反应,与HEV病毒颗粒竞争试验阴性,与GST融合的HEV无关蛋白无交叉反应性,表明1A8和9B4识别的抗原表位不是HEV病毒颗粒表面
3、天然存在的抗原表位,而是GST与HEVORF2编码蛋白的465-601aa区段序列共同形成的新的抗原表位。结论:GST能够赋予基因工程重组蛋白以新的抗原特性,它与融合表达的重组蛋白可以共同形成新的抗原表位。【关键词】GST融合表达戊型肝炎病毒单克隆抗体抗原表位13 ［Abstract］AIM:ToinvestigatetheeffectofaGSTtagontheantigenicstructureofGSTfusion-expressedandORF2-encodedrecombinantp
4、roteinsofhepatitisEvirus(HEV).METHODS:Themonoclonalantibodies(mAb)werepreparedwithaGSTfusionprotein,p166Chn-GST,whichwasderivedfromaChineseHEVstrain.ThentheyweretestedbyindirectELISA,competitionELISAandWesternblotwithdifferentGSTfusion,Hisfusionornon
5、-fusionrecombinantproteinsderivedfromHEVreferencestrainsofall4genotypesandothernon-HEVrecombinantproteins.RESULTS:ThreemAbnamed1A8,9B4and8H10wereobtained.Allofthemreactedtop166Chn-GSTbutdidnotreacttoGST.mAb1A8and9B4reactedto4p166-GSTproteinsofdiffere
6、ntHEVgenotypesand2N-orC-terminaltruncatedp166Chn-GSTproteinsnamedp146Chn-GSTandp137Chn-GST,buttheydidnotreactto4p166-HisproteinsofdifferentHEVgenotypesandanon-fusionp179Chnprotein.Nodetectablesignalswerefoundwhen1A8and9B4weresubjectedtoHEVantigencomp
7、etitionELISAorWesternblotafterSDS-PAGE.NocrossreactionwasobservedbetweenthetwomAbandHEV-irrelevantGSTfusionproteins,either.CONCLUSION:AnovelantigenicepitoperecognizedbymAb1A8and9B4appearsontheGSTfusion-expressed13andORF2-encodedHEVrecombinantproteins
8、anditisdependentontheconformationalfoldingofbothGSTandHEVsequences. ［Keywords］GSTfusion-expression;hepatitisEvirus;monoclonalantibody;antigenicepitope 体外表达的基因工程重组蛋白能够模拟微生物结构或功能蛋白的生物学活性,因而在病原微生物研究的各个领域应用广泛。为了正确折叠和方便制备的需要,重组蛋白常常与谷胱甘肽硫转移酶（GST）、聚组氨酸（nH
