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《gst与戊型肝炎病毒orf2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定：梁久红,梁立敏△,董敏,韩振格,董晨,孟继鸿【摘要】 目的:以戊型肝炎病毒（HEV）ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体（mAb）,与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中国株p166的GST或His融合蛋白、中国株非融合重组蛋白p179Chn以及GST融合的HEV无关蛋白进行ELISA检测,鉴定mAb
2、所识别的抗原表位。结果:获得3株稳定分泌抗p166Chn-GST的杂交瘤细胞株,分泌的mAb1A8、9B4和8H10与p166Chn-GST反应,与GST不反应。其中1A8和9B4可与带GST标签的4种p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反应,而不与4种p166-His蛋白反应,也不与p179Chn反应,与HEV病毒颗粒竞争试验阴性,与GST融合的HEV无关蛋白无交叉反应性,表明1A8和9B4识别的抗原表位不是HEV病毒颗粒表面天然存在的抗原表位,而是GST与HE
3、VORF2编码蛋白的465-601aa区段序列共同形成的新的抗原表位。结论:GST能够赋予基因工程重组蛋白以新的抗原特性,它与融合表达的重组蛋白可以共同形成新的抗原表位。【关键词】GST融合表达戊型肝炎病毒单克隆抗体抗原表位 ［Abstract］AIM:ToinvestigatetheeffectofaGSTtagontheantigenicstructureofGSTfusion-expressedandORF2-encodedrebinantproteinsofhepatitisEvirus(HEV).M
4、ETHODS:Themonoclonalantibodies(mAb)aChineseHEVstrain.ThentheyHEVreferencestrainsofall4genotypesandothernon-HEVrebinantproteins.RESULTS:ThreemAbnamed1A8,9B4and8H10reactedtop166Chn-GSTbutdidnotreacttoGST.mAb1A8and9B4reactedto4p166-GSTproteinsofdifferentHEVgeno
5、typesand2N-orC-terminaltruncatedp166Chn-GSTproteinsnamedp146Chn-GSTandp137Chn-GST,buttheydidnotreactto4p166-HisproteinsofdifferentHEVgenotypesandanon-fusionp179Chnprotein.NodetectablesignalsAbandHEV-irrelevantGSTfusionproteins,either.CONCLUSION:Anovelantigen
6、icepitoperecognizedbymAb1A8and9B4appearsontheGSTfusion-expressedandORF2-encodedHEVrebinantproteinsanditisdependentontheconformationalfoldingofbothGSTandHEVsequences. ［Keyonoclonalantibody;antigenicepitope 体外表达的基因工程重组蛋白能够模拟微生物结构或功能蛋白的生物学活性,因而在病原微生物研究的各个领域应用
7、广泛。为了正确折叠和方便制备的需要,重组蛋白常常与谷胱甘肽硫转移酶（GST）、聚组氨酸（nHis）等蛋白标签融合表达。但是融合表达也会带来新的问题,可能改变目的蛋白的空间结构,影响其抗原性,甚至在用于抗体检测时出现假阳性［1］。我们在研究戊型肝炎病毒（hepatitisEvirus,HEV）结构蛋白抗原表位特征时,发现用带GST标签的HEV重组蛋白p166Chn-GST制备的部分单克隆抗体（mAb）与带His标签的p166Chn-His不反应。为研究这些mAb所识别的抗原表位特征,我们应用HEV不同基因型4个代
8、表株重组蛋白p166的GST融合蛋白和His融合蛋白、非融合蛋白p179Chn、GST融合的p166截短蛋白、与HEV无关的其他GST融合蛋白以及GST蛋白,作了仔细的抗原表位鉴定,证实GST可以和与它融合表达的重组蛋白共同形成新的抗原表位。 1材料和方法 1.1材料pET-28a载体和大肠杆菌BL21菌株购自Novagen公司;Ni-NTA树脂购自上海申能博彩生物制品公司;BAL
