cyp1a1基因多态性

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1、CYP1A1基因多态性作者：刘芳孙黎杨翠军李华刘开扬【摘要】目的探讨张家口地区健康人群CYP1A1基因MspI和Ile/Val的多态性。方法采用等位基因特异性扩增和PCR限制性片段长度多态性（RFLP）技术，分析360例张家口地区健康成人的CYP1A1基因3′端限制性内切酶MspI位点和Exon7位点的3种基因型的分布规律。结果张家口健康人群MspI基因型m1m1占35.8%，基因型m1m2占50.2%，基因型m2m2占14.0%，等位基因m1m2分别为60.9%，39.1%。Ile/Val多态性，其Ile及Val等位基因的频率分别为68

2、.5%，31.5%。Ile/Ile，Ile/Val，Val/Val基因型分布频率分别为44.4%，48.1%，7.5%。结论张家口地区健康人群CYP1A1基因存在MspI和Ile/Val的多态性。【关键词】CYP1A1；MspI；Ile/Val；基因多态性　　CYP1A1是细胞色素P(CYP)450家族的一名成员，是体内重要的Ⅰ11相解毒酶之一，参与多种内外源性化学物质体内代谢过程〔1〕。CYP1A1由CYP1A1基因编码，CYP1A1表达受基因控制和环境因素诱导，并存在种族和个体差异。主要分布于肺、肾、胃肠道、皮肤、胎盘等组织中，参与内源

3、性和外源性化合物在体内代谢过程，主要通过氧化、还原、水解等作用，改变化合物所具有的功能基团。或使其分解。CYP1A1主要参与多环芳烃类化合物(PAH)的代谢，把其代谢为酚类物质活性很强的环氧化物，这些环氧化物在致癌、致突变中都有重要作用〔2，3〕。目前为止，已发现CYP1A1基因MSPI和Ile/Val多态在不同的种族、民族和地区的分布有很大差异。本试验采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)的技术，探讨张家口地区健康人群CYP1A1基因的MspI和Ile/Val多态性分布。　　1材料与方法　　1.1研究对象　　随机选择3

4、60例无血缘关系的健康张家口地区人员，均在原籍稳定居住2代以上，年龄18～55岁。经张家口河北北方学院第一附属医院门诊查体健康，无遗传疾病的健康人群。其中男性186例，女性174例。　　1.2标本收集　　从上述人群中每人抽取外周静脉全血3ml，EDTA抗凝，-80℃保存待测。　　1.3基因组DNA的制备11　　DNA提取试剂盒提取DNA。　　1.4PCR反应　　1.4.1MspI基因型测定　　采用等位基因特异性扩增方法PCRRFLP技术，MspI基因型测定所需引物，其序列为上游5′CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT3′，下游5

5、′TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT3′。PCR的反应条件:反应总体积50μl，含有200μmol/LdNTP，上、下游引物各0.4μmol/L，基因组DNA0.4μg，1UTaqDNA聚合酶。在PCR仪上扩增，扩增参数：97℃预变性7min，然后95℃，50s，66℃复性50s，72℃延伸1min，30个循环后72℃延伸10min。其PCR产物为340bp的DNA片段。取10μlPCR产物，加10UMspI限制性内切酶，37℃水浴4h，酶切产物经1.8%琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml溴化乙锭)电泳40min，电压150V，在紫

6、外透射仪上观察结果。　　1.4.2Ile/Val多态性测定　　采用等位基因特异性扩增方法PCRRFLP技术，分析Ile/Val多态性，引物序列：上游5CTGTCTCCCTCTGGTTACAGGAAGC311′，下游5′TTCCACCCGTTGCAGCAGGATAGCC3′。反应体系同上，扩增参数：95℃预变性5min，然后95℃，30s，63.5℃复性30s，72℃延伸30s，30个循环后72℃延伸7min。其PCR产物为204bp的DNA片段。取10μlPCR产物，加10UBsrDI限制性内切酶，25℃水浴24h，酶切产物观察同

7、上。　　1.5CYP1A1多态性　　1.5.1MspI基因型　　扩增产物经酶切后分为3种基因型：没有MspI切割位点的等位基因m1的纯合子基因型m1m1(野生型)，可见340bp一个片段；有MspI切割位点的等位基因m2的纯合子基因型m2m2(突变型)，可见200及140bp两个片段；m1和m2的杂合子基因型m1m2(杂合型)，可见340，200，140bp三个片段。　　1.5.2Ile/Val多态性　　扩增产物经酶切后分为3种基因型：没有切割位点为纯合子基因型Ile/Ile(野生型)，可见204bp一个片段；有BsrDI切割位点的等位基因

8、Val/Val的纯合子基因型(突变型)，可见65及139bp两个片段；Ile/Val(杂合型)，可见204，139，65bp三个片段。11　　　1.6统计学方法　　采用SPSS软