cu和cd对皱纹盘鲍幼鲍haliotis+discus+hannai+ino的毒性及饲料硒和硫辛酸对其解毒作用的研究

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1、万方数据谨以此篇献给中国海洋大学动物营养与饲料实验室辛勤工作的全体师生！万方数据万方数据万方数据Cu和Cd对皱纹盘鲍幼鲍(HaliotisdiscushannaiIno)的毒性及饲料硒和硫辛酸对其解毒作用的研究摘要本文以我国北方主要养殖贝类之一—皱纹盘鲍(HaliotisdiscushannaiIno)为研究对象，采用静水系统进行摄食生长试验。研究重金属Cu和Cd对皱纹盘鲍的毒性作用，并探讨饲料中的硒和硫辛酸对其解毒作用的影响，主要的研究内容和结果如下：1、为了研究不同浓度的水体铜对皱纹盘鲍存活率、抗氧化能力、脂质过氧化及组织Cu积累量的影响，采用0.02、0

2、.04、0.06、0.08mg/LCu2+分别刺激皱纹盘鲍0、1、3、6、10、15、21、28天后，测定皱纹盘鲍肝胰脏抗氧化酶（超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GPx、谷胱甘肽硫转移酶GST）、抗氧化小分子谷胱甘肽（GSH）、总抗氧化力（T-AOC）、丙二醛（MDA）的含量以及肝胰脏和肌肉组织中Cu积累量。结果发现，在0.04mg/L、0.06mg/L和0.08mg/LCu2+浓度下，皱纹盘鲍分别在实验的第21天、第10天和第6天全部死亡。在0.02mg/LCu2+浓度下，皱纹盘鲍在28天内存活率为100%。大体上来说，肝胰脏SOD

3、和GST的活力随着时间的延长而呈下降的趋势，CAT和GPx的活力及GSH的含量在各Cu浓度下均高于对照组，肝胰脏T-AOC在各Cu离子浓度下呈下降的趋势。在0.02mg/LCu2+浓度下，MDA的含量显著升高后降低到对照水平。在0.04、0.06、0.08mg/LCu2+浓度下，MDA的含量均高于对照组。皱纹盘鲍肝胰脏和肌肉中Cu积累量随着浓度的增加和时间的延长呈上升的趋势。结果表明，在各Cu离子浓度下，Cu离子胁迫导致了皱纹盘鲍的氧化应激，CAT、GPx和抗氧化小分子GSH在抵抗Cu的氧化胁迫中发挥了重要的作用。而且Cu离子的胁迫导致了机体的脂质过氧化水平的

4、提高，从而导致了皱纹盘鲍的死亡。2、本试验以初始重量为(3.17±0.01)g的皱纹盘鲍(HaliotisdiscushannaiIno)为研究对象，在其饲料中分别添加硒0.10、1.31和4.20mg/kg配制成3种半精制饲料，在Cu含量为0.02mg/L的静水养殖系统中饲养2个月，探讨饲料中的硒对皱纹盘鲍解毒中的作用。实验利用同源克隆技术和RACE技术从皱纹盘鲍的肝脏中成功扩增出金属硫蛋白(metallothionein,MT)和金属转录因子(Metaltranscriptionfactor-1,MTF-1)。MT基因全长cDNA序列包含个551bp，其中

5、包括108bp的5’非编码区、255bp的3’非编码区和188bp的开放阅读框。其中开放阅读框编码69个氨基酸，预测分子量约为6.996KDa，理论等电点为5.16。MTF-1基因cDNA全长为2278bp，包括25bp的5’非编码区、626bp的3’非编码区和1566bp的开放阅读框，开放阅读框编码522个氨基酸，预测分子量约为59.63KDa，理论等电点为5.61。饲料中不同的硒添加水平对Cu胁迫下皱纹盘鲍生长和存活无显著性影响。1.31mg/kg硒实验组显著降低了皱纹盘鲍肝胰脏和血清中的Cu含量，且1.31mg/kg硒实验组鳃、外套膜、肌肉和贝壳中的Cu

6、含量均低于对照组。饲料中的硒显著升高了肝胰脏TrxR的活力和GSH的含量。1.31mg/kg硒实验组肝胰脏MDA的含量和蛋白羰基含量均显著低于对照组。实验对皱纹盘鲍利用实时荧光定量PCR技术进行HdhMT及HdhMTF-1的表达分析。分析表明皱纹盘鲍肝胰脏中MT含量、HdhMT和HdhMTF-1mRNA表达水平呈现先升高后降低的趋势，即在1.31mg/kg的硒饲料组中的表达量最高，但是在4.20mg/kg的硒饲料组中表达量降低。上述的研究结果表明，硒的添加在一定程度上可以提高Cu胁迫下的皱纹盘鲍的抗氧化水平，降低脂质过氧化的水平和蛋白羰基水平。而且MT的mRN

7、A的表达和蛋白含量及上游调控因子MTF-1受到饲料中硒含量的影响，说明MT可能在皱纹盘鲍抗Cu的毒性中发挥重要的作用。总体来说，1.31mg/kg的硒缓解Cu毒性的效果要好于4.20mg/kg。3、本试验以初始重量为(3.17±0.01)g的皱纹盘鲍(HaliotisdiscushannaiIno)为研究对象，在其饲料中分别添加α-硫辛酸0、0.7和2.1g/kg配制成3种半精制饲料，在Cu含量为0.02mg/L的静水养殖系统中饲养2个月，探讨饲料中的硫辛酸对皱纹盘鲍抗Cu毒性中的作用。在Cu离子的胁迫下，皱纹盘鲍的特定生长率(SGR)随着饲料中LA的增加而升

8、高，但与对照组并无显著性的差异。0.7