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1、不孕患者血小板活化因子及其受体表达变化【摘要】目的探讨不孕患者血浆血小板活化因子(PAF)、血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性的变化,以及外周血中单个核细胞(PBMC)PAF受体(PAF-R)的表达。方法对10例女性不孕患者采用生物法检测血浆中PAF含量,酶水解底物显色法测定PAF-AH活性,流式细胞仪检测PBMC上PAF-R的表达。并与10例有正常生育功能的女性健康体检者对照。结果不孕患者血浆中PAF含量(5．21±1．81)μgPL,PAF-AH活性(24．50±7．76)μmol/(min•L)、PBM
2、C上PAF-R的表达与健康体检者比较差异有统计学意义(P<0．01)。结论PAF、PAF-AH、PAF-R三者在女性不孕的发生和发展中起重要作用。�【关键词】女性不孕;血小板活化因子;血小板活化因子乙酰水解酶;血小板活化因子受体�个体的免疫功能紊乱在女性不孕的机制中起着极为重要的作用，血小板活化因子(PAF)是研究较早的一种免疫早孕因子，本实验探讨女性不孕患者血浆PAF、PAF乙酰水解酶(PAF-AH)的变化及外周血中单个核细胞(PBMC)上PAF5受体(PAF-R)的表达,以期为女性不孕机制的探讨和治疗提供一种新的方法与手段。�
3、1资料与方法�1．1研究对象2006年10月至2007年12月在深圳流花医院及深圳市妇幼保健院不孕门诊就诊的不孕患者10例，排外解剖、染色体及男方精液常规检查异常等因素。年龄24~42岁，不孕年限3~10年。�1．2实验方法�1．2．1主要试剂仪器PAF标准品(Sigma公司产品),PAF-AH检测试剂盒和鼠抗人PAF-RIgG(Cay2man产品,晶美生物公司代理),FITC标记的兔抗鼠IgG,流式细胞仪(BD)等。�1．2．2PAF测定取全血1ｍｌ,加无水吡啶和醋酐各10μｌ,加入4ｍｌ甲醇中,旋涡混合,离心后吸取上清液加入氯
4、仿和双蒸水1ｍｌ,用生物法检测PAF含量[1-2]。�1．2．3血浆PAF-AH活性检测采静脉抗凝血2ml,浓缩为0．5ml,按试剂盒操作,酶标仪读取不同时间的A值,用PAF-AH标准品对照,计算出各样本PAF-AH的活性。�1．2．4外周血PBMC上PAF-R的表达采静脉血1ml,分离出PBMC,取1×10�5细胞悬液,加鼠抗人PAF-R单抗40μl,FITC标记的兔抗小鼠单抗40μl,对照管加FITC标记的正常兔IgG40μl,混匀后置4℃3min,PBS洗3次,弃上清液,加固定液0．55ml,尼龙网过滤后用流式细胞仪分析。�
5、1．3统计学方法实验数据用SPSS10．0软件包进行处理,结果以均数±标准差(x±s)表示,数据统计用t检验、单因素方差分析和直线相关分析。�2结果�2．1两组血浆PAF含量及PAF-AH活性比较两组血浆PAF含量及PAF-AH活性比较见表1。�2．2两组外周血PBMC中PAF-R阳性细胞比例及表达两组外周血PBMC中PAF-R阳性细胞比例及表达见表2。�3讨论�血小板活化因子(PAF)是Benveniste在1972年用IgE刺激嗜碱性粒细胞时发现一种能使血小板聚集的可溶性脂类物质[1]。1979年证实这种具有强烈生物学活性的脂
6、质结构为1-烷基-2-乙酰基-Sn-甘油-3-磷酸胆碱[2]。现已知道，PAF通过对黄体细胞的作用，在排卵期间影响卵泡细胞的功能以及黄体的形成；PAF增加着床前鼠胚的氧化代谢；PAF可直接作用于胚胎或作为胚胎自身分泌的生长因子，直接刺激自身的发育；PAF活化母体血小板产生的PDGF，促进胚胎发育；PAF引起子宫内膜的的蜕膜反应；PAF调节细胞免疫，抑制淋巴细胞的增殖，降低IL-2的产量，增加抑制性T细胞的活性，在妊娠早期对胚胎母体之间进行免疫调节，保护胎儿不受到免疫排斥。�
5PAF在不孕妇女中降低并维持的机制复杂，在实验中发现不
7、孕妇女患者血浆中PAF-AH(PAF-AH有血浆型和细胞型两种)活性显著降低，其可能的机制为：PAF-AH的降低，致使PAF的半衰期延长，同时刺激巨噬细胞分泌IL-1、TNF及PG，并与之协同增加氧自由基(OFR)的产生，这种非细菌性的炎性反应使盆腔内生殖环境发生改变，包括病灶及周围组织的渗出、纤维素沉着、腹腔液容积及成分变化,致使卵子的发育、排卵、精子的运动及精卵结合而导致不孕。�同其他细胞因子作用方法一样，PAF主要通过与细胞表面的PAF-R结合，通过Ca��2+�,IP3和Zn��2+�,NF-κbeta,TNF,LFA-1
8、,丝氨酸蛋白酶等参与介导生物学反应。PAF-R广泛存在于血小板、中性粒细胞、T淋巴细胞及肺组织等上面，人类子宫内膜PAF-R的cDNA与人类白细胞PAF-R几乎完全一样[3]。在实验中发现不孕妇女PBMC中PAF-R阳性细胞比例及表达数目均显著降低
