补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织血小板活化因子受体mRNA表达的影响.doc

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1、补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织血小板活化因子受体mRNA表达的影响作者：张继平,林爱华李蜀光,文凤妮,姚晖,谢伟贤,王志彬,李齐欢【摘要】　　[目的]观察补阳还五汤对脊髓损伤(SCI)模型大鼠脊髓组织血小板活化因子受体(PAFR)mRNA表达的影响。[方法]选用SPF级Wistar大鼠，随机分为4组：正常组、模型组、补阳还五汤组(剂量为40g·kg-1·d-1)、金纳多组(剂量为45.5mg·kg-1·d-1);采用Allens法复制中度SCI模型，造模成功后观察1周;连续给药2周后，取各组脊髓组织，采用实时

2、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测各组脊髓组织PAFRmRNA表达水平。[结果]模型组大鼠脊髓组织PAFRmRNA表达显著降低(P<0.01);补阳还五汤组及金纳多组均可抑制脊髓组织PAFRmRNA表达，与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)，而两给药组之间比较无显著性差异(P>0.05)。[结论]补阳还五汤对损伤脊髓的保护作用可能与其能减少PAFR数目，抑制PAFR活性，从而阻断PAF发挥损伤效应有关。【关键词】补阳还五汤/药理学脊髓损伤/中药疗法基因表达调控疾病模型动物大

3、鼠　　补阳还五汤已广泛用于神经损伤后的保护与修复治疗，如脑梗死、外伤性截瘫、周围神经损伤等[1]。血小板活化因子(plateletactivatingfactor，PAF)是体内一种重要的脂质类生物信息分子和重要的炎性细胞因子，脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)后PAF含量明显升高，通过与其特异性受体(receptor，R)结合，引发脊髓的继发性病理损伤[2-3]。本文采用实时逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法，观察了补阳还五汤治疗大鼠SCI后，脊髓组织内血小板活化因子受体(PAFR)mRN

4、A表达水平的变化，旨在探讨补阳还五汤对引发脊髓继发性损伤的靶点之一--PAF的阻断作用机制。现将结果报道如下。　　1材料与方法　　1.1药物补阳还五汤由广东一方制药有限公司提供的中药配方颗粒严格遵照原方配比而成，含生黄芪120g，当归尾6g，赤芍4.5g，地龙、川芎、桃仁、红花各3g，实验大鼠按照3倍临床等效剂量40g/kg灌胃给药。金纳多(银杏叶提取物)为德国威玛舒培博士药厂产品(批号：8781006)，实验大鼠按照3倍临床等效剂量45.5mg/kg给药。　　1.2仪器及试剂Ultrospec4300紫外可见分光

5、光度计为瑞士安法玛西亚公司产品;ABI7300PCR扩增仪为美国应用生物系统(ABI)公司产品;大鼠PAF受体基因引物和探针由广州市达晖生物科技有限公司设计合成，引物序列为：(上游)5TGAGCATTATGAGCCATACAGTGT3，引物长度24bp，解链温度(meltingtemperature,Tm)59.1℃;(下游)5TGATGACCATGTTGCAGTAGAAGA3，引物长度24bp，Tm58.9℃;产物长度为107bpcDNA。探针序列：FAMTCCTTGTCGTCC5ACATCTT

6、CATCACCTCCTGTAMRA，探针长度31bp，Tm69℃;RNA的提取及逆转录试剂由上海生工提供;DNA扩增试剂及标准品由广州市达晖生物科技有限公司提供;其他试剂均为国产分析纯。　　1.3实验动物及造模SPF级Wistar大鼠76只，雌雄各半，体质量(195±10)g，由南方医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)20060015/2006B023/2006A052;在南方医科大学实验动物中心实验室进行实验，温度(23±5)℃，湿度(60±15)℃标准环境[动物设施合格证号：SYXK(粤)20

7、060074]。以100mg/L水合氯醛3.5g/kg腹腔注射麻醉大鼠，背部剪毛，将动物俯卧固定于手术台上，100mg/L的活力碘消毒，以T12棘突为中心取背部正中切口，长约3cm，显露T11L1棘突及椎板。用特制的手术钳咬除T11下半、T12全椎板及L1上半椎板，以脊髓为中心显露直径约2.8mm圆形区，在硬膜表面垫一弯曲度与脊髓表面一致的塑料垫片。采用Allens打击法[4]，用直径约2.4mm重5g的圆柱状重锤从10cm高处，沿细玻璃导管垂直下落，打击垫片致T12脊髓急性挫伤，致伤力为5×10gcf(gr

8、am·cm·force)，逐层缝合伤口。造模完成后，每天肌注青霉素钠2万U，1次/d，单笼管理饮食，每8h按摩膀胱排尿，并用碘伏消毒伤口，直至膀胱功能恢复。模型大鼠观察1周，伤情稳定后，模型组进行随机化分组。　　1.4动物分组及给药76只Wistar大鼠先按性别分层，然后根据体质量采用随机数字表法分组，其中正常组16只，其他实验大鼠采用Allens打击法制