中药苦参碱对体外培养人宫颈癌hela细胞的抑制作用论文

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1、中药苦参碱对体外培养人宫颈癌Hela细胞的抑制作用论文金畅，滕小玲，雷亚宁，周颖，郑膺，张婵【摘要】目的:探讨中药苦参碱对体外培养的人宫颈癌细胞株Hela细胞的抑制作用。方法:选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养，以0.125～2.0mg/ml的苦参碱分别处理Hela细胞24～72h后，MTT法检测细胞增殖.freelRNA表达水平。结果:苦参碱对Hela细胞有抑制作用，呈剂量和时间依赖性,其24h半数抑制浓度（IC50）为1.074mg/ml；流式细胞仪检测到细胞在苦参碱作用后，细胞凋亡率增加；透射电镜

2、观察发现部分细胞发生凋亡早期改变；RT-PCR结果显示凋亡相关基因Bcl-2/Bax比值随药物剂量增加而逐渐减少。结论:苦参碱对人宫颈癌Hela细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡可能是其机制之一。【关键词】苦参碱；宫颈癌；凋亡Abstract:Objective:ToexploretheinhibitoryeffectofmatrineonhumancervicalcarcinomaHelacellsinvitro.Methods:TheHelacellsg/ml)ofmatrinesolutionfor

3、24～72hours.MTTassayedtoevaluatethecytotoxineffectofmatrineonHelacells.FCMissionElectronMicroscopeanalysesinethecellmorphology.SemiquantitativeRT-PCRRNAlevelsofBcl-2andBaxgeneexpressions.Results:Differentconcentrationsofmatrinese-dependentanddose-dependent

4、manner.TheFCManalysisshoatrine.Partialcellspresentedcharacteristicmorphologicalchangesunderthetransmissionelectronmicroscope.TheresultsofRT-PCRshoatrineconcentrationincreased.Conclusion:MatrinecaninhibittheproliferationofhumancervicalcarcinomaHelacellsinv

5、itro.Inducingapoptosismaybeoneofthemechanisms.Keyatrine;cervicalcarcinoma;apoptosis苦参碱是从中药苦参（sophoraflavescentait）的干燥根中提取的具有广泛药理作用的活性物质，现代医学研究表明苦参碱具有抗病毒、抗感染、平喘、增强机体免疫力、升高白细胞、保肝等作用。最近研究表明,苦参碱在体外培养的肝癌、肺癌和白血病中有明显的抗肿瘤作用，且没有化疗药物的毒副作用1-4。因此，苦参碱的抗肿瘤作用引起广泛关注，成为研究

6、的热点。但目前苦参碱对宫颈癌抑制作用方面的研究报道较少。本研究选择人宫颈癌Hela细胞，初步探讨苦参碱对体外培养的Hela细胞的抑制作用。1材料和方法1.1材料宫颈癌细胞株Hela细胞由温州医学院第一附属医院科研中心惠赠。胎牛血清、DMEM培养基为Gibco公司产品。四甲基偶氮唑盐（MTT）、二甲基亚枫（DMSO）为美国Sigma公司产品。苦参碱（斯巴特康）注射液为广州明兴药业有限公司产品（批号：060904-2）。Trizol为Invitrogen公司产品。M-MLV逆转录酶和Taq聚合酶及PCR常规试

7、剂为日本Takara公司产品。1.2方法1.2.1细胞培养：将冻存的宫颈癌Hela细胞37℃快速融解，常规复苏和传代。放在含10%胎牛血清的DMEM培养液，37℃，5%CO2培养箱内培养。细胞贴壁80%时传代，1周大约2次。1.2.2细胞增殖的测定（MTT法）：取对数生长期Hela细胞，以1×104个/孔加入96孔培养皿，过夜贴皿后，加入不同浓度的苦参碱，分别为0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml，每个浓度设5个复孔，没加药物的细胞作为对照组，另设

8、空白调零孔。分别培养24h、48h、72h后，加入5mg/ml的MTT20μl，37℃孵育4h，弃上清，每孔加入200μlDMSO，振荡，使结晶溶解，上机检测570nm处吸光度A值。细胞生长抑制率=（1-实验组平均A值/对照组平均A值）×100%。实验重复3次，取平均值。1.2.3流式细胞仪检测细胞凋亡率：Hela细胞按1×105个/ml接种于6皿板，24h后分别换含0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml苦参碱的