bmp2，4mrna在balbc系小鼠颅面部发育中的定位表达

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1、BMP2，4mRNA在BALB/c系小鼠颅面部发育中的定位表达【关键词】原位杂交,关键词:骨形成蛋白;颅面部发育;原位杂交　骨形成蛋白（BonemorphogeneticProteins，BMPs）属于TGF-β超家族，最初从牛的脱矿骨骨基质提取出来，在活体内可诱导异位成骨.但近年来的研究表明，BMPs还是生长和发育中的调控分子.为了探讨BMPs在颅面部发育过程中的表达、区域及变化，为进一步研究颅面部畸形（如腭裂、唇裂、牙齿发育畸形等）的发生机制打下基础，作者检测了BMP2，4在颅面部各组织正常发育中的表达模式.

2、1材料和方法1.1材料BALB/c近交系孕鼠在妊娠期第14，15，16日分别被脱椎处死，取胎鼠头部固定于40gL-1多聚甲醛，常规脱水包埋，作头部冠状切片.1.2方法质粒pSP-65和BluescriptSK分别含有BMP2cDNA和BMP4cDNA片段，分别由美国基因研究所Dr.Wozney和得克萨斯大学JianQuanFeng提供，采用随机物延伸法标记地高辛作为探针.石蜡切片经常规脱蜡至水及0.1molL-1PBS后，分别用0.2molL-1HCL和蛋白酶K处理，乙醇脱水干燥.42℃杂交20h后，分别用2×S

3、SC，1×SSC，bufferⅠ，bufferⅡ依次充分洗涤.羊血清封闭30min后，滴加抗标记碱性磷酸酶地高辛抗体2h，洗涤后用显色液（bufferⅢ1000μL，左旋米唑0.24mg，NBT4.5μL及BCIP3.5μL）暗处显色2h，TE液中止反应，常规脱水透明封片.实验对照为除去探针的空白对照及RNase消化对照.阳性对照为已反复证明为有阳性反应的骨肉瘤标本.2结果GD14，BMP2mRNA转录的区域主要位于鼻中隔、下鼻甲、舌体等组织的未分化间充质细胞以及麦克尔软骨前体细胞中（Fig1）.在一些上皮性区域

4、，无论是舌的上皮细胞，还是下颌突的上皮细胞中，表达BMP2mRNA的阳性细胞数目都很少，在牙胚中也未见BMP2的阳性信号，BMP4除了在BMP2阳性表达的区域有表达外，舌、腭、突、舌、下颌突的上皮细胞中BMP4也有散在的阳性着色（Fig2）.GD15，鼻中隔软骨细胞中逐渐出现BMP2的弱阳性信号，在一些分化较好的细胞，如成熟的舌肌细胞中，BMP2，4均无表达.但在一些有软骨细胞形成的区域（如鼻中隔、麦克尔软骨）等处仍有BMP2，4的表达（Fig3）.GD16，麦克尔软骨细胞已形成，分化成熟的舌肌细胞也已构成了舌体

5、的大部分.此时，BMP2，4的表达量均锐减，阳性细胞着色较前明显变浅（Fig4），阳性信号只存在于未分化的间充质细胞中.3讨论近年来的研究表明，在眼、肾、肢体、面突、牙胚、骨骼、神经系统等多种组织和器官的早期发育中也有BMPs的转录［1，2］.BMPs在胚胎发育中表达的广泛性，提示BMP很可能还是一种信号分子.Vainio等［3］研究表明，BMP4在启动牙齿发育中首先表达在牙胚的上皮中，他将含有BMP4的缓释珠与牙胚中的间充质细胞共培养，发现原来无BMP4mR-NA转录的间充质细胞中出现了BMP4的转录.GD14

6、-16为颅面部各组织器官中的未分化间充质细胞由聚集、增殖向细胞分化的转变期，在此期间，未分化细胞向麦克尔软骨细胞以及舌肌细胞分化.本实验结果表明，GD14，在未分化的间充质细胞中BMP2，4mRNA都有表达，但只有BMP4mRNA在上皮细胞中表达.当进入GD15，分化的细胞中基本都无BMPsmRNA的表达.例如，舌肌细胞中不表达BMP2，4mRNA，但未分化的舌肌前体细胞中仍有BMP2，4的表达.表明一旦细胞完成发育，BMPs将不再起促分化作用.而在一些软骨形成区（如鼻中隔、麦克尔软骨），即使未分化间充质细胞向软

7、骨细胞的分化已经完成，其中仍有BMP2，4的强表达，因此此时起使用的可能不仅是BMPs的信号传递作用，其诱骨活性也开始发挥作用.因此，BMP2主要在发育早期起作用，而BMP4在早期和晚期都起作用.参考文献:［1］TenDijkep，YamadhitaH，SampathTK.IdentificationoftypeReceptorsforosteogenicprotein-1andbonemorphogeneticpro-tein-4［J］.JBiolChem，1994;269（25）:16985-16988.［2

8、］DudleyAT，LoyonsKM，RobertsonEJ.Arequirementforbonemorphogeneticprotein-7duringdevelopmentofthemam-maliankidneyandeye［J］.GenesDev，1995;9（22）:2795-2807.［3］VainioSMullerU.Inductivetissueinte