s100a4, a10在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达及意义的论文

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1、S100A4,A10在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达及意义的论文作者：柏干苹，周丽娜，贺伟峰，罗高兴，陈烯伟，陈光兴，胡晓红，石东文，方勇飞，吴军【摘要】目的：探讨正常人与类风湿关节炎(ra)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异，分析差异蛋白在ra发病中的作用.方法：应用固相ph梯度(ipg)双向凝胶电泳(2de)分离正常人及ra患者滑膜成纤维细胞总蛋白质；应用双向电泳凝胶分析软件（pdquest7.3.1）对2de凝胶进行量化比较分析；应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定部分差异蛋白质，并用:tofind

2、thedifferentiallyexpressedproteinsofsynovialfibroblasts(sfs)fromrheumatoidarthritis(ra)patientsandnormalcontrolsusingtensionalgelelectrophoresis(2de)andbioinformaticsforprovidingusefulandneentofra.methods:thetotalproteinofsfsfromeitherrapatientsornormalonesean

3、sofimmobilizedphgradientbasedon2de.gelsagesatrixassistedlaserdesorptionionizationtimeofflightmassspectrometry(malditofms).thensomeofthemmunocytochemistry.results:896proteinspotsalindividuals,and992spotsinra,respectively.thereraalditofms,and2validprotei

4、nsbindingproteins100a4ands100a10.munocytochemistryrathaninsfsfromnormalindividuals.furthermore,thedistributionofs100a4insfsightbeinvolvedininflammationofsynovitisinra.thesedatae;tensionalelectrophoresis;rheumatoidarthritis;s100a4;s100a10　　0引言　　类风湿关节炎(rheumatoid

5、arthritis,ra)是一种自身免疫性疾病，以非化脓性增生性滑膜炎为特点，逐渐导致关节软骨的破坏及关节功能的障碍.近年来研究显示滑膜成纤维细胞在ra的发生、发展中发挥着t细胞依赖途径所不可解释的重要作用，从而引起了人们的重视［1-2］.虽然滑膜成纤维细胞在关节炎中的作用已得到肯定，但其功能的分子机制仍不明确.本研究利用高分辨双向电泳(tensionalgelelectrophoresis,2de)对正常人及ra患者滑膜成纤维细胞进行蛋白质分离，筛选差异蛋白质，为探讨滑膜成纤维细胞在ra发病中的作用提供新的线索.

6、　　1材料和方法　　1.1材料人关节滑膜组织取自5例在重庆西南医院及新桥医院关节外科行关节置换术的ra患者及7例正常人外伤后行滑膜切除术者，12例患者均签署知情同意书，ra患者临床诊断均符合美国风湿病学会标准［3］.固相ph梯度(immobilizedphgradientgelstrip,ipg）干胶条(ph3～10,17cm)、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺，3［(3胆胺酰丙基)二甲基氨基］1丙基磺酸酯（3［(3cholamidopropyl)dimethylammonio］1propanesulfona

7、te,chaps），尿素，碘乙酰胺，二硫苏糖醇(dithiothreitol,dtt)，十二烷基磺酸钠(sodiumdodecylsulfate,sds)，两性电解质(pharmalyte,ph3-10),蛋白定量试剂盒，低熔点琼脂糖(美国biorad公司)；硫脲（美国sigma公司）；双向电泳系统（proteiniefcell等电聚焦仪,proteiniixicell垂直电泳槽,校准型光密度仪gs800calibrateddensitometer，凝胶定量软件quantityone4.5.0，双向电泳凝胶分析软件

8、pdquest7.3.1）（美国biorad公司）.s100a4及s100a10抗体（美国santacruz公司），荧光化学发光成像系统chemidocxrs（美国biorad公司）；免疫组化染色试剂盒(spkit)（北京中衫生物技术公司）；其余试剂均为国产分析纯.　　1.2方法　　1.2.1滑膜成纤维细胞的培养参照文献［4］的方法进行滑膜