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《通痹灵对类风湿关节炎滑膜细胞血管内皮生长因子mrna的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、通痹灵对类风湿关节炎滑膜细胞血管内皮生长因子mRNA的影响论文.freelRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织消化分离滑膜细胞进行分组培养。空白对照组：含生理盐水＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵低剂量组：50mg/L通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵高剂量组：200mg/L通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGFmRNA的表达。结果通痹灵高、低剂量组VEGFmRNA表达较对照组明显降低(P＜0.05)。结论通痹灵可以下调RA患者滑膜
2、细胞VEGFmRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。【关键词】通痹灵；类风湿关节炎；滑膜细胞；血管内皮生长因子Abstract：ObjectiveTostudyeffectofTongbiling(TBL)onVEGFmRNAexpressioninRAsynovlcytesculturedinvitroandexploreitsmechanism.MethodSynovialcellsfromthekneejointinpatientissiongroupofTBL：DMEMculturecontaining10%FBSin50m
3、g/LTBL；High-doseadmissionofTBL：DMEMculturecontaining10%FBSin200mg/LTBL.RNARNARNAinloissiongroupsofTBLbothdecreased(P0.05).ConclusionExpressionofVEGFmRNAcanbedecreasedbyTBL,sotheproliferationofthesynovialpannuscanbealleviatedbyinhibitionofVEGFexpression.Keyatoidarthritis；synovialcel
4、l；vascularendothelialgroatoidarthritis,.freel,FBS,杭州四季青公司生产),胶原酶、胰蛋白酶、焦碳酸二乙酯(diethylpyrcarbonate,DEPC,美国GIBCO公司生产),PCRmarker(北京鼎国生物技术发展中心),RT-PCR通用试剂盒及β-Actin引物(大连宝生物工程有限公司),Primer软件设计及VEGF基因扩增引物(赛百胜公司)。CO2恒温培养箱(德国HERAEUS公司生产),倒置相差显微镜、荧光显微镜(日本OLYMPUS公司生产),超净工作台(苏州净化设备厂生产),核酸蛋白成像仪(P
5、harmacia公司),核酸蛋白分析仪(Beckman公司),电泳仪及水平电泳槽(美国Bio-Rad公司),PCR仪(美国PERKINEIMER公司),低温高速离心机(SIGMA公司),常温低速离心机(北京医用离心机厂),分光光度计(Beckman公司),电转仪(美国Bio-Rad公司)。1.2类风湿关节炎患者滑膜细胞的分离提取及培养RA患者肿胀的膝关节行关节腔镜手术取滑膜组织。将所取标本倒入玻璃皿中,用Hanks液洗涤3次,用眼科剪反复剪碎组织约2～3mm2大小,加入含10%胎牛血清的DMEM和0.2%胶原酶(终浓度为0.2%),移入75cm2培养瓶中,3
6、7℃、5%CO2培养箱中消化10min；反复吹打后移入离心管,1000r/min离心10min；弃去上清液,加入2mL含10%胎牛血清的DMEM吹打终止消化；用200目钢网过滤后1000r/min离心10min,去上清液,加入含10%的DMEM2mL吹打均匀,移入75cm2培养瓶中于37℃、5%CO2培养箱中培养,观察细胞生长情况。生长3d后细胞生长良好,长满培养瓶,消化分瓶,定时观察换液,长到一定数量后冻存部分细胞保证以后备用,剩余部分维持培养,取7～10代用于实验,每瓶待细胞长至约0.8×107时施加作用因素。空白对照组：含生理盐水＋10%胎牛血清的DM
7、EM培养；通痹灵低剂量组：1.5μg/mL通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵高剂量组：150μg/mL通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养。待施加因素后培养72h,细胞生长至107时进行裂解细胞提取总RNA。1.3总RNA提取取培养的滑膜细胞消化离心,用PBS洗涤3次,加入0.8mLRNAsol完全裂解细胞,转移裂解液至1.5mLEP管中,加入80μL氯仿,水平震动10s,冰浴5min,40℃低温离心机10000r/min离心20min,吸取上清液移至另一EP管中,加入等量异丙醇完全混合后冰浴20min,40℃低温离心机10000r/min离心20
8、min,去上清液,用1mL75%乙醇洗涤沉淀物,小心
