肝癌组织高迁移率族蛋白b1（hmgb1）的表达及其与临床病理因素的关系论文

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1、肝癌组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的表达及其与临床病理因素的关系论文摘要：目的探讨HMGB1蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及对原发性肝细胞癌的诊断价值。方法应用免疫组化及计算机图像分析方法测定30例原发性肝细胞癌及癌旁组织标本（自身配对组织）HMGB1蛋白表达，及其与原发性肝细胞癌临床病理因素的关系。结果HMGB1在肝癌组织呈过表达，其表达高于肝癌旁组织（P＜0.05）；HMGB1在包膜不完整、有淋巴结转移肝癌中的表达分别高于包膜完整及无淋巴结转移者（均P＜0.05），随着Edmondson病理学分级增加，HMGB1表达增高（P＜0.05

2、）。而HMGB1表达与肿瘤患者年龄、性别、肿瘤大小无明显相关（均P＞0.05）。结论HMGB1可能在原发性肝细胞癌的发生、发展，浸润及转移中发挥重要的作用。HMGB1可能是原发性肝细胞癌的一种新的潜在的肿瘤特异性标志物。关键词：肝细胞癌；HMGB1；免疫组织化学；计算机图像分析高迁移率族蛋白B1（high-mobilitygroupbox-B1,HMGB1）是高度保守的非组蛋白DNA结合蛋白，哺乳动物中HMGB1具有99%的同源性质，HMGB1作为一种核蛋白.freel为分界分别留取肝癌癌灶组织，非癌组织各30例。其中男24例，女6例，年龄3

3、6-75岁，平均年龄59.6±10.5岁。瘤体＜5cm16例，瘤体≥5cm14例，所有标本均经病理组织学证实为原发性肝细胞肝癌。二、方法1.免疫组织化学法兔抗人HMGB1多克隆抗体及S-P免疫组化试剂盒分别购自美国PTG公司，北京中杉金桥生物技术有限公司。肝癌及癌旁组织免疫组化以经典的S-P法进行（HMGB1工作浓度1：100，每片滴加HMGB1一抗，4℃冰箱过夜）DAB显色，以PBS液代替一抗作为阴性对照，以已证实HMGB1染色阳性的肝癌标本作阳性对照。2.计算机图像分析应用HPIAS—1000高清晰度病理图文分析系统对免疫组化结果进行定量

4、分析。（详细操作步骤参照HPIAS—1000型图像分析仪使用手册。）3.结果判断：（1）免疫组化细胞核和/或细胞浆出现棕黄色或棕褐色染色颗粒为阳性细胞。每张切片在高倍镜下（X200）随机观察5个视野，计数200个细胞/视野，阳性细胞数＜15%为表达阴性（-），阳性细胞数15%-50%为表达弱阳性（+），阳性细胞数51%-75%为表达中等强度阳性（++），阳性细胞数＞75%为表达强阳性（+++），其中阳性细胞数大于50%为过表达。（2）计算机图像分析每组标本均在400×放大倍数下按照无偏采样原则取5个视野，每个视野均按照无偏采样原则取5个细胞进

5、行测定。根据阳性单位（PU）结果来判断免疫组化染色强度的差异。PU值用均值+标准差（）表示。4统计学分析应用SPSS13.0统计软件分析处理。多样本和两样本半定量积分的阳性表达比较均采用Kruskal-GB1蛋白表达较低，表现为少数胞核和（或）胞浆微弱着色。HMGB1蛋白在肝癌组织中呈过表达，阳性颗粒主要位于细胞核中，细胞浆也有微弱着色（图1～4）。肝细胞癌组织中HMGB1阳性表达率为80%，与癌旁组织30%相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。肝细胞癌组织Ⅰ、Ⅱ-Ⅲ、Ⅳ级中HMGB1蛋白阳性表达率逐渐增加，分别为62.5%、83%、90%

6、，（均P＜0.05）。随着肝细胞癌淋巴结的转移，HMGB1蛋白的阳性表达率增加，分别为76.2%、89%，包膜不完整肿瘤的HMGB1阳性率（81.8%）高于包膜完整者（78.9%），其差异均有统计学意义（P＜0.05）。而HMGB1蛋白与肝细胞癌患者年龄、性别及肿瘤大小无关（均P＞0.05）。计算机图像分析结果与免疫组化结果一致（详见表1～2）。中呈阳性表达×100中呈阳性表达×4002．计算机图像分析结果表1HMGB1与肝细胞癌及癌旁组织的关系表2HMGB1与原发性肝细胞性肝癌临床病理因素的关系组别例数阳性单位（PU）（）P值性别男2513

7、.67±0.350.517女511.11±1.08年龄/岁＜5069.83±0.960.180≥502414.30±0.10肿瘤大小/cm＜51612.17±0.430.432≥51414.47±1.23肿瘤包膜完整1911.13±0.590.041不完整1116.89±8.80Edmondson分级Ⅰ级（高分化）86.57±0.450.041Ⅱ-Ⅲ级（中分化）1212.51±0.180.001Ⅳ级（低分化）1018.95±1.120.034淋巴结转移无2110.99±0.010.014有918.48±1.23四讨论高迁移率蛋白B1（high

8、-mobilitygroupbox-B1,HMGB1）基因于1973年首先由Sanders等6,7在小牛胸腺中发现，人HMGB1定位于13q12带，编码含215个氨