乙型肝炎肝纤维化组织差异蛋白的筛选及ddah1的功能研究

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1、乙型肝炎肝纤维化组织差异蛋白的筛选及DDAH1的功能研究：罗新华，程明亮，张权，杨勤【摘要】　　目的：对比分析乙型肝炎纤维化和非纤维化肝组织的蛋白质组表达谱的差异，探讨二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶1（DDAH1）在肝纤维化发生发展中的功能。方法：利用双向凝胶电泳（2-DE）筛选肝纤维化和非纤维化肝组织差异表达的蛋白质，质谱鉴定差异蛋白质，A）的含量，一氧化氮合酶（NOS）活性及NO2-/NO3-比值。结果：鉴定出DDAH1等25个2倍以上的差异蛋白质；肝纤维化组织中DDAH1的活性降低，ADMA含量增加，NOS活

2、性下降，一氧化氮（NO）含量减少。结论：乙型肝炎肝纤维化与非纤维化肝组织的蛋白质表达谱有一定差异，DDAH1有可能通过调节ADMA的代谢而影响NO合成，参与了肝纤维化的发生发展。【关键词】肝炎，乙型，慢性；纤维化；蛋白质组学；二甲基精氨酸；二甲基氨基水解酶类　　［Abstract］Objective:TopareandanalyzethedifferenceofproteomicexpressionprofilesbetanhepatitisB(HB)derivedhepaticfibrosistissuesan

3、dnon-fibrosislivertissues,andanalyzethefunctionsofdimethylaminohydrolase(DDAH1)intheformationanddevelopmentofhepaticfibrosis.Methods:Thedifferentialexpressionofproteinsensionelectrophoresis(2-DE)andidentifiedassspectrogramafterthetotalproteinhepaticfibrosisti

4、ssueandnonfibrosislivertissue.DDAH1expressionmetrydiethylarginine,(ADMA)concentration,nitricoxidesynthase(NOS)activity,andnitrogenmonoxidium(NO)concentrationined.Results:Tityol/Lvs1.16±0.21μmol/L,P＜0.01）,NOSactivitylolvs7.65±0.91U/ml,P＜0.05）,andtheNOcontentde

5、creased（55.72±11.32μmol/Lvs96.27±17.84μmol/L,P＜0.01）.Conclusions:ThereisdifferenceofproteinexpressionspectrabetightbeinvolvedintheformationanddevelopmentofhepaticfibrosisbyregulatingADMAmetabolismandimpactingNOsynthesis.　　［Keyics;diethylarginine;dimethylamino

6、hydrolase蛋白质组学作为后基因时代研究的一个重要内容，已广泛深入到生命科学和医药学的各个领域，将这种高通量的研究策略引入到肝纤维化发生过程的研究中，能够在一个实验系统中同时研究多种蛋白质的变化,有助于全面阐明肝纤维化的发生机制[1]。目前，有关肝纤维化发生机制的蛋白质组学研究基本集中在细胞培养及动物实验上，对人乙型肝炎肝纤维化的发生机制进行系统的蛋白质组学研究少见报道。2007年8月，以乙型肝炎肝纤维化患者为研究对象，对比研究其与人非纤维化肝组织蛋白组表达的差异，分析其中的部分差异蛋白在肝纤维化发生发展中

7、的作用，以期揭示人类乙型肝炎肝纤维化发生的可能机制，为防治提供更为客观的科学依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1临床资料　　6例肝纤维化组织于贵阳医学院附院及贵州省人民医院肝胆外科慢性乙型肝炎（CHB）患者因肝外伤、肝癌等进行肝脏手术时切除的肝脏标本，并根据2000年病毒性肝炎防治方案[2]中肝纤维化病理诊断标准诊断为肝纤维化3～4级。男5例，女1例，年龄38～56岁。6例非纤维化肝组织于同期肝血管瘤、肝外伤手术的肝脏标本，并经病理确诊，男4例，女2例，年龄31～52岁。所有样本均符合人体实验伦理学

8、标准，并征得患者知情同意。取得组织后立即在无菌状态下用冰生理盐水洗净血液，-80℃冰箱中保存备用。　　1.1.2主要实验试剂　　超纯尿素、硫脲、苯甲基磺酰氟、二硫苏糖醇、蛋白酶抑制剂试剂盒、核酶混合物、碘乙酰胺、PVDF膜（美国GE公司），固相pH梯度干胶条（美国Bio-Rad公司），十二烷基硫酸钠、甲叉双丙烯酰胺、α氰基-4-羟基肉桂酸、乙腈（美国Sigma公司），胰蛋