红景天苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用论文

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1、红景天苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用论文颜天华贾莹杨伟王秋娟【摘要】目的：研究红景天苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法：红景天苷灌胃给药7d后制作大鼠大脑中动脉闭塞（middlecerebralarteryocclusion，MCAO）模型，观察大鼠行为学改变；取大脑并用氯化四唑（tetrazoliumchloride，TTC）染色后测定梗塞百分比和含水量；进行大脑组织学检查，制作脑匀浆测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、Na+K+ATP酶、Ca2

2、+ATP酶，乳酸（LD）和NO的含量.结果：红景天苷高、中剂量组（48，24mg/kg）均能使动物的行为学评分、梗塞百分比、脑含水量显著降低，能改善脑组织学损伤.freelg/片）；川芎嗪（河北巨龙药业有限责任公司，批号：051009，50mg/片）；乳酸（LD）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒、考马斯亮蓝试剂盒、ATP酶测定试剂盒、NO测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；其他试剂均为市售分析醇；SD大鼠70只（河南省实验动物中心

3、），雄性，体质量250～350g，清洁级，适应性饲养3d后用于实验；501型恒温水浴（上海仪器厂）；台式干燥箱（重庆万达有限公司）；TU1800紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）.1.2方法1.2.1动物分组将SD大鼠按体质量随机分为7组，每组10只，分别为假手术组：给予等量生理盐水；模型组：给予等量生理盐水；尼莫地平组：按1mg/kg给予尼莫地平；川芎嗪组：按18mg/kg给予川芎嗪；红景天苷高、中、低剂量组：分别按48，24，12mg/kg给予红景天苷.以上各组给药时均将药物按所需剂

4、量溶解于生理盐水（5mL/kg）后灌胃给药.1.2.2造模于实验前7d开始灌胃给药，1次/d.第7日于缺血前60min给药.采用颈内动脉线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞（MCAO）模型［3-4］.动物用100g/L水合氯醛（300mg/kg）皮下注射麻醉后仰卧手术台.从颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，向外牵引二腹肌及胸锁乳突肌，由颈总动脉分叉处向头端依次游离，并注意分离伴行的迷走神经.结扎并剪断颈外动脉的分支：枕骨下动脉和甲状腺上动脉，在颈外动脉远端结扎，切断颈外动脉使其主干游离备用，然后分离颈内动脉，用

5、丝线在颈外动脉根部打一松扣，夹闭颈总动脉和颈内动脉.将长5cm、直径0.28mm的尼龙线经颈外动脉主干切口，缓慢向颈内动脉入颅方向推进，以颈总动脉分叉处为标记，推进18mm左右时感到阻力，即达到了较细的大脑前动脉内，阻断了MCA的所有血供来源，扎紧颈外动脉根部松扣.缺血1h，拔出尼龙线，扎紧颈外动脉残端，缝合颈部切口.假手术组大鼠麻醉后仅暴露颈内外动脉分叉，不闭塞MCA.每部分实验均按照相同方法分组给药及造模.1.2.3局灶性脑缺血再灌注大鼠的行为学评分、梗塞百分比、脑含水量的测量术后24h按Beder

6、son的方法［5］对动物的行为缺陷进行分级评分.0级：未观察到神经症状；1级：提尾悬空时，动物的手术对侧前肢表现为腕肘屈曲，肩内旋，肘外展，紧贴胸壁；2级：将动物置于光滑平面上，推手术侧肩向对侧移动时，阻力降低；3级：动物自由行走时向手术对侧环转或转圈；4级：软瘫，肢体无自发活动.MCAO24h后断头处死大鼠，取出大脑，称湿质量.在视交叉及其前后各2mm处做冠状切片5片，于10g/LTTC中37℃避光孵育30min，其中每隔7～8min翻动1次，再分离苍白区（梗塞区）和非苍白区（正常区），计算梗塞百分比.

7、梗塞百分比（%）=苍白区质量/（苍白区质量+非苍白区质量）×100%.将染色后的脑组织置于110℃烘箱烘干，对照大脑湿质量计算脑含水量.脑组织含水量（%）=（1－脑组织干质量/脑组织湿质量）×100%1.2.4局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织学的观察动物分组、给药及手术方法同前.于MCAO后24h处死大鼠，取出大脑于100mL/L甲醛溶液中固定.标本于腊制模具中切片后行HE染色，对大脑皮层海马进行病理组织学检查.1.2.5局灶性脑缺血再灌注大鼠脑匀浆生化指标的测定动物分组、给药及手术方法同前.在MCAO2

8、4h后大鼠处死取大脑，用生理盐水制成100g/L匀浆，按试剂盒说明书测定大脑组织中的SOD，MDA，GSH，Na+K+ATP酶、Ca2+ATP酶、LD和NO的含量.脑匀浆蛋白含量按考马斯亮蓝法测定.统计学处理：实验数据用x±s表示.采用单因素方差分析进行组间显著性比较,两组间样本均数比较采用t检验.2结果2.1红景天苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠的行为学评分、梗塞百分比、脑含水量的影响同假手术组相比，模型组的MCAO大鼠脑