药品微生物限度检查方法验证方案

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1、药品微生物限度检查方法验证方案文件编号：YF·QC-F-56-2014-01药品微生物限度检查方法验证方案2014年1月15日药品微生物限度检查方法验证方案文件编号：YF·QC-F-56-2014-01方案审批1方案起草起草部门签名日期质量控制部年月日2方案会签部门签名日期QC部长年月日微生物检验员年月日QA部长年月日3方案批准批准人签名日期质量负责人年月日4方案实施实施部门职责质量控制部对验证工作与检验相关的数据的采集与检验验证方案、报告的编写质量保证部负责验证方案和报告的审核对人员进行培训文件进行整理归档质量负责人对验证工作全面主持批准验证方案和报告微生物检验员方案具体实施，并出具检

2、验记录和报告第0页共9页药品微生物限度检查方法验证方案文件编号：YF·QC-F-56-2014-01目录1.概述2.仪器设备3.供试液的制备4.细菌、霉菌及酵母菌计数5.控制菌检查6.验证品种项目表第7页共9页通化金汇药业股份有限公司药品微生物限度检查方法验证方案文件编号：YF·QC-F-56-2014-011微生物限度检查法概述微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、真菌数、酵母菌数及控制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空

3、气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。除另有规定外，本检查法中细菌的培养温度为30～35℃，真菌、酵母菌的培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为（36±1）℃。检验结果的报告以1g、1ml、10g、10ml为单位报告。检验量即一次试验所用的供试品。除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的三倍量供试品。2仪器设备2.1YXQ-LS-30SII型立式压力蒸汽灭菌器2.2双人净化工作台2.3150A型培

4、养箱2.4HH.B11-500型培养箱2.5202-2型干燥箱2.6微波炉2.7架盘天平2.8YJA-电动匀浆仪3供试液的制备根据供试品的理化特征与生物学特征，可采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需要用水浴加热时，温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。第7页共9页通化金汇药业股份有限公司药品微生物限度检查方法验证方案文件编号：YF·QC-F-56-2014-01液体供试品：取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。固体供试品：取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为

5、1：10供试液。4细菌、霉菌及酵母菌计数4.1计数方法的验证：当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。若产品的组分或检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。无特殊情况下，验证周期为一年。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。4.2菌种及菌液制备4.2.1验证用菌株：试验用菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。验证菌株培养基培养温度培养时间大肠埃希菌[CMCC(B)

6、44102]营养肉汤30—35℃18-24h金黄色葡萄球[CMCC(B)26003]营养肉汤30—35℃18-24h枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]营养肉汤30—35℃18-24h白色念珠菌[CMCC(F)98001]改良马丁琼脂培养基23—28℃24-48h黑曲霉菌[CMCC(F)98003]改良马丁琼脂培养基23—28℃5-7天4.2.2菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。取经30～35℃培养18～24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%

7、无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6～10-7约为50～100cfu∕ml的菌悬液备用。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24～48小时。取经23～28℃培养24～48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5第7页共9页通化金汇药业股份有限公司药品微生物限度检查方法验证方案文件编号：YF·QC-F-56-2014-01约为50～100cfu∕m