自体外周血纯化cd34+细胞移植对系统性红斑狼疮患者外周血cd4+cd25+t细胞表达的影响

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1、自体外周血纯化CD34+细胞移植对系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25+T细胞表达的影响【关键词】造血干细胞移植CD4+CD25+T细胞系统性红斑狼疮　　ABSTRACT:ObjectiveTostudychangesoftheperipheralbloodCD4+CD25+Tcellsinpatientsiclupuserythematosusafterautologousperipheralbloodpurifiedstemcellstransplantation.MethodsTotally15patientsiclupu

2、serythematosuscellstransplantationetryeasureCD4+CD25+Tcellscountingbeforetransplantationandat3,6,12,24monthsaftertransplantation.ResultsBeforetransplantation,thepercentageofCD4+CD25+Tcellsonthsaftertransplantation,theCD4+CD25+Tcellscountingincreasedmarkedlyparedonthsaf

3、tertransplantation.CD4+CD25+TcellsofrelapsedSLEarkedlylocellstransplantationcaneffectivelyincreasethelevelofCD4+CD25+Tcellsinpatientsiclupuserythematosus.　　KEYouseIgG2b/FITC、同型对照MouseIgG2a/PE均购自深圳晶美有限公司。FACSCalibur型流式细胞仪(美国BectonDickinson公司)。　　1.3外周血的采集分别于移植前、移植后3、6、12

4、、24个月取患者肘前静脉。使用一次性采血针抽血，用5mL注射器抽2mL静脉血丢弃，将注射器从采血针上取下后，将采血针插入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，取1mL静脉血沿试管壁缓慢注入抗凝管，6h内送检。同法采健康对照组外周血。　　1.4流式细胞术检测CD4+CD25+T细胞的表达情况标本分成两个流式管，分别作检测管和同型对照管。取EDTA抗凝的SLE患者外周血100μL，分别放入各流式管，检测管加入FITC标记的鼠抗人CD4单克隆抗体(IgG2b)及PE标记的鼠抗人CD25单克隆抗体(IgG2a)，同型对照管加入MouseIgG2

5、b/FITC及MouseIgG2a/PE各10μL，轻轻混匀，室温避光20min后，加入红细胞裂解液2mL，振荡混匀后避光至10min，1000r/min离心5min，弃上清；加入磷酸盐缓冲液(PBS)悬浮细胞，以1000r/min离心5min，弃上清；再用PBS1次，离心弃上清，加入0.3mLPBS悬浮细胞，室温避光10min后上机。使用光源为488nm的氩激光。上机前先用标准微球进行光路和流路的教正，使变异系数在2%以下。用同型对照确定荧光阴性范围，根据细胞的前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)特性初步圈取淋巴细胞群门

6、，每份标本中测定淋巴细胞群门中10000个淋巴细胞中CD4+CD25+T细胞的百分率。　　1.5统计学处理组间CD4+CD25+T细胞表达水平的比较应用SPSS10.0统计软件进行重复测量数据的方差分析。移植前SLE患者组与对照组外周血CD4+CD25+T细胞的表达水平的比较进行配对t检验。复发与未复发组间采取单向方差分析。结果中所列数据以±s表示。以P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1移植前SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞的表达水平移植前SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞的表达水平为(7.61±

7、1.86)%，明显低于对照组(11.21±2.38)%，差异有统计学意义(t=8.025，P<0.01)。　　2.2移植前后不同时期SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞的表达水平CD4+CD25+T细胞在移植前后不同时间段均有不同程度的表达(图1)。移植前SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞表达水平较低，移植后3个月开始增高，移植6、12、24月后恢复到较高水平。移植前后不同时间内CD4+CD25+T细胞表达水平的差异有统计学意义(F=19.502，P<0.01，表1)。　　表1移植前后不同时期SLE患者外周血C

8、D4+CD25+T细胞的表达水平（略）　　Table1ExpressionofCD+4CD+25Tcellsinperipheralbloodinpatients.*P<0.01vs.beforetransplantation;