hplc-elsd 法测定复方丹参滴丸中人参皂苷rg1, rb1 和三七皂苷r1 的含量[j]

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1、中药新药与临床药理.2002,13(3):174-176HPLC-ELSD法测定复方丹参滴丸中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量黄永焯，王宁生(广州中医药大学临床药理研究所，广州510405)关键词：@复方丹参滴丸／化学；人参皂苷／分析；三七皂苷／分析；色谱法，高压液相；@蒸发光散射检测器摘要：目的:建立复方分参滴丸中人参皂苷Rgl和Rb1，三七皂苷R1的含量测定方法。方法：应用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)，采用固相萃取技术对样品进行预处理，HypersilNH2柱，流动相为乙腈-异丙醇-10mmol/

2、L醋酸铵水溶液(冰醋酸调ph5.0)(15:4:1)；流速：0.6mL·min-1，测定了复方丹参滴丸中人参皂苷Rg1、Rb1，和三七皂苷R1的含量。结果：该方法测定人参皂苷Rg1、Rb1，和三七皂苷R1的线性范围为1.0～10.0μg，其加样回收率为95.3～100.4%，日内精密度≤2%、日间精密度≤4%。结论:方法简便准确，可为三七制剂的含量测定方法提供借鉴。中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1003-9783(2002)03-0174-03复方丹参滴丸由丹参、三七和冰片等三味中药，经科学方法提取有效成分精制而成，

3、是治疗心血管疾病的常用药。其中三七PanaxNotoginseng(Burk.)F.H.Chen是我国名贵的中药材，其主要活性成分达玛烷系四环三萜类皂苷具有多种显著的药理作用，含三七的复方制剂常以其作为指标成分进行含量测定。采用高效液相色谱—蒸发光散射检测法对复方丹参滴丸中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1进行了含量测定。在样品预处理中，采用固相萃取技术(SPE)直接对样品水溶液进行净化处理，并采用NH2柱，以乙腈-异丙醇-10mmol/L醋酸铵水溶液[冰醋酸调PH5,0](15:4:1)为流动相的RP-HPLC法，可取得满意的结果

4、。1仪器与试药Waters515高效液相色谱仪，Alltech500蒸发光散射检测器，WatersMillennium32色谱工作站。安捷伦AccuBONDIIODSSPE柱(500mg，6mL)。人参皂苷Rg1和Rb1，三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所)，复方丹参滴丸(天津天士力公司)，乙腈（Merck色谱纯），异丙醇（Tedia色谱纯)，三蒸水，其他试剂均为广州化学试剂厂分析纯。2方法与结果2.1色谱及检测条件色谱柱：大连伊利特Hypersil氨基柱（200mm*4.0mm，5μm）；流动相：乙腈-异丙醇-10mmol/

5、L醋酸铵水溶液(冰醋酸调pH5.0)(15:4:1)；流速0.6mL•min-1；柱温：室温；ELSD漂移管温度：55℃；氮气流量：2.3L／min。在上述色谱条件下，人参皂苷Rg1，和Rb1，三七皂苷R1三者可达基线分离。2.2样品供试品溶液的制备精密称取复方丹参滴丸样品适量(约0.25g)、精确加入8mL三蒸水，超声处理10min过滤，取滤液。精确移取2mL加于已处理好的ODS固相萃取柱(10mL甲醇活化，5mL水平衡)，先用20%甲醇3mL淋洗，然后用40%和50%甲醇各3mL洗脱，一齐收集为A液；再用65%和70%甲醇各3mL

6、洗脱，一齐收集为B液。于水浴60℃空气吹干。残渣精确加入流动相1mL溶解，过0.45μm滤膜，取续滤液备用。A液供测定人参皂苷Rg1、三七皂苷R1；B液供测定人参皂苷Rb1。2.3线性关系分别精密称取人参皂苷Rg1，和Rb1，三七皂苷R1对照品适量，用甲醇溶解配制成0.2mg·mL-1的溶液，取此溶液50，40，25，10，5μL依次进样，按色谱测定条件，测得人参皂苷Rg1和Rb1，三七皂苷R1的峰面积，用最小二乘法以进样量(μg)对数(lgX)对峰面积对数(1gY)进行线性回归，回归方程分别为：Rg1：1gY＝6.1986+1.27

7、511gX(r2＝0.9987)R1：1gY＝6.1690+1.278511gX(r2＝0.9996)Rb1，：1gY＝6.0608+0.2254lgX(r2＝0.9998)线性范围为1.0～10.0μg。2.4样品测定取样品供试品溶液在上述色谱条件下测定，结果见表1。表1样品测定结果（N=3）批号人参皂苷Rg1人参皂苷Rb1三七皂苷R1含量/(mg·g-1)RSD%含量/(mg·g-1)RSD%含量/(mg·g-1)RSD%9805132.24671.92.42940.41.05252.29910163.26560.83.56552

8、.21.23701.90004313.02480.63.10510.81.25642.12.5精密度试验日内精密度试验：取对照品溶液适量连续进样5次，测得各峰面积，计算RSD。日间精密度试验：取对照品溶液适量连续进样5d