羟基喜树碱对人胰腺癌细胞panc

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1、羟基喜树碱对人胰腺癌细胞PANC作者：赖日勇，李小波，许春鹃，叶金花【摘要】　　目的研究羟基喜树碱对人胰腺癌panc-1细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法mtt法测定羟基喜树碱对panc-1细胞生长的抑制作用；流式细胞仪检测羟基喜树碱对panc-1细胞周期、凋亡率和caspase-3活性的影响。结果羟基喜树碱能抑制panc-1细胞生长，并呈剂量依赖关系，其半数抑制浓度(ic50)为51.52μg/ml；流式细胞仪检测显示低浓度羟基喜树碱处理后可将细胞先后阻滞于s期和g2/m期，高浓度的羟基喜树碱则诱导细胞凋亡；细胞凋亡率和caspase-3活性随药物浓度升高和处理时间延长而逐渐递增。结论

2、羟基喜树碱能抑制人胰腺癌panc-1细胞的生长，其抗肿瘤作用机制与阻断细胞周期、诱导细胞凋亡和激活caspase-3活性有关。【关键词】羟基喜树碱人胰腺癌细胞panc-1抗肿瘤作用羟基喜树碱（hydroxycamptothecin,hcpt）是从我国珙桐科植物喜树中分离出的20多个单体中抗癌作用最强的微量植物碱，是一种dna拓扑异构酶i（dnatopoisomerasei,dnatopoi）抑制剂。.大量的临床研究证明，羟基喜树碱具有抗肿瘤作用强和毒性低的优点，具有广谱抗肿瘤作用，对多种肿瘤细胞株及移植瘤有较高的抑制率［1］。目前羟基喜树碱对胰腺癌的治疗研究很少［2］，为此本文研究了羟基喜

3、树碱对胰腺癌细胞panc-1的抑制作用及其作用机制，以期为临床应用提供理论基础和依据。　　1材料与仪器　　1.1细胞系人胰腺癌细胞panc-1由日本大阪大学消化器一般外科赠送。　　1.2药品与仪器羟基喜树碱针剂（贵州汉方制药有限公司提供，批号20030403）；噻唑蓝（mtt）、dmem高糖培养基（gibco公司产品）；二甲基亚砜(dmso，上海生物工程有限公司产品)；新生牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司产品）；细胞周期测定试剂盒、caspase-3活性测定试剂盒、流式细胞仪（bectiondikinson公司产品）；co2培养箱（forma公司产品）；multiskanmk3酶标仪

4、(thermolabsystems公司产品)。　　2方法　　2.1细胞培养将panc-1细胞接种于含10％灭活新生牛血清的dmem高糖培养液中（不含抗生素），在37℃、5％co2、饱和湿度下培养。3d传代1次，隔天换液1次，取对数生长期的细胞进行实验，分别用各种浓度的羟基喜树碱处理细胞，未加药组为对照组。　　2.2细胞生长抑制率的测定采用噻唑蓝还原法进行检测。取对数生长期的panc-1细胞接种于96孔培养板中(密度为1×104/孔)，每组设6个平行孔。加入用dmem高糖培养液稀释的不同浓度羟基喜树碱(6.25，12.5，25，50，100，200，400μg/ml)分别培养，以未加羟基喜树

5、碱为对照组。加药培养48h后每孔加入mtt(5mg/ml)20μl，37℃继续培养4h后，离心后吸去上清液，每孔加入dmso100μl，振荡10min使结晶充分溶解,酶标仪570nm波长检测各孔吸光度(a值),计算细胞生长抑制率及半数抑制浓度（ic50）值。细胞生长抑制率（%）=(1-实验组平均a值/对照组平均a值)×100%。　　2.3细胞周期及凋亡率测定收集不同浓度羟基喜树碱(0，6.25，25，100μg/ml)处理24、48和72h后的panc-1细胞，预冷的pbs洗涤细胞两次，预冷的70%乙醇固定过夜。2000r/min离心10min，弃去乙醇，再次悬浮于预冷的pbs，细胞经溴化

6、丙啶(pi，10μg/ml)染色5min，4℃避光30min后，上流式细胞仪，激发光波长为488nm，吸收波长610nm。检测细胞dna水平，根据dna水平在流式细胞仪中得出每份样品的g0/g1，s和g2/m期细胞分布图。ly-sis软件(bectondickinson公司产品)分析。　　2.4细胞caspase-3活性（相对荧光值）测定收集不同浓度羟基喜树碱(0，6.25，25，100μg/ml)处理24，48和72h后的panc-1细胞，预冷的pbs洗涤细胞2次，预冷的70%乙醇固定过夜。2000r/min离心10min，弃去乙醇，再次悬浮于预冷的pbs，按caspase-3活性测定试

7、剂盒说明书进行操作,上流式细胞仪测定caspase-3活性（相对荧光值）。　　2.5统计学分析采用统计软件spss14.0进行数据处理。　　3结果　　3.1羟基喜树碱对panc-1细胞生长抑制率的测定结果见图1。羟基喜树碱能有效抑制panc-1细胞生长，6.25，12.5，25，50，100，200及400μg/ml羟基喜树碱对panc-1细胞的生长抑制率分别为(9.9±5.2)%、(20±5.7)%、(35.8±6.9