桂枝对mrl小鼠心肌细胞凋亡及caspase 3基因表达的影响的论文

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1、桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡及Caspase3基因表达的影响的论文【摘要】目的探讨中药桂枝对mrl小鼠心肌细胞凋亡的作用及对caspase3基因表达的影响。方法将mrl小鼠分为空白组、强的松组和桂枝组，检测mrl小鼠心肌组织凋亡细胞，计算心肌细胞凋亡指数（ai），ｒｔ-ｐｃｒ法检测心肌细胞凋亡基因caspase3表达，观察桂枝对mrl小鼠心肌细胞凋亡的影响。结果桂枝能调控心肌细胞凋亡基因caspase3表达，即抑制caspase3表达，明显抑制心肌细胞凋亡(心肌细胞凋亡指数显著下降)。其疗效明显优于空白组（p<0.05），有显著性差异，与强

2、的松组疗效相当（p>0.05）。结论桂枝可能通过调控凋亡基因而抑制心肌细胞凋亡，从而延缓或部分逆转mrl心肌损害的发生、发展。【关键词】mrl小鼠；细胞凋亡；caspase3基因表达系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,sle）是一种多因素参与的累及全身多脏器、多系统的自身免疫性疾病，现代医学多采用肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、非甾体抗炎药等治疗，但有明显的副作用，停药后病情也易反复，治疗现状不容乐观。目前在中医中药领域内寻找治疗sle及sle心肌损害的有效药物，并从调控凋亡基因、抑制细胞凋亡切入研究其作用机

3、理，是一项很有裨益的探索。本实验对mrl小鼠应用桂枝进行了该方面的探讨。　　1材料与仪器　　1.1动物　　8～10周龄雌性mrl小鼠，体质量20～25g，由上海动物中心提供。.　　1.2药品桂枝药物由河北工程大学附属教学中医院提供，强的松片由浙江仙居制药厂生产。　　1.3试剂rna提取试剂trizolreagent购自华美生物工程公司，为invitrogen公司产品；逆转录酶（amv-rt），核糖核酸酶抑制剂（rnasin），dntp，taqdna聚合酶（taqdnapolymerase），随机引物（randomprimers），琼脂糖（agar

4、ose）均购自美国promega公司。　　1.4仪器756型紫外分光光度计为上海精密仪器厂生产；geneamp9600型pcr仪为美国pe公司生产；rs-28高速低温离心机为德国贺利氏公司生产；超低温冰箱为德国贺利氏公司生产；uvp凝胶扫描系统由美国uvp公司生产；微量移液器为德国gilson公司生产；dyz-22a型双恒定时电泳仪为北京市六一仪器厂生产；dyy-ⅲ桥式电泳仪为北京市六一仪器厂生产。　　2方法　　2.1实验分组与给药36只雌性mrl小鼠，随机分为3组，即空白对照组，强的松组，桂枝组，各12只。空白对照组给予生理盐水灌胃1ml/d，

5、强的松组给予强的松混悬液灌胃0.02g·ml-1·d-1，桂枝组给予桂枝煎剂0.12g·ml-1·d-1，分两次给予，各组灌胃3周后处死动物，取心室肌组织。　　2.2检测指标与方法　　2.2.1心肌细胞凋亡ladder电泳用碱裂解法提取心肌ｍｄａ,洗涤,ｔｅ过夜溶解。制备15%的琼脂糖凝胶，加入dna样品，以5v/cm的电压电泳1～2ｈ，紫外透射仪观察dna条带，成像、照片。　　2.2.2凋亡及相关基因检测迅速分离心脏,常规石蜡包埋，切片数张。心肌细胞凋亡按末端脱氧核苷酸转移酶(tdt酶)介导的带荧光的dutp缺口末端标记法(tunel)标记凋亡

6、细胞核的3’末端。分离mrl小鼠心脏，使用200℃干烤的器械于手术台上留取100mg心室肌组织，迅速将组织置于4℃depc水中洗去血液后，置冻存管中保存于液氮中，m-caspase3基因按照相应的rt-pcr实验流程进行检测，引物序列依据文献报道设计，由上海生物工程公司合成，rt-pcr产物在1%琼脂糖凝胶（含goldviein，用uvp凝胶图像成像系统拍摄打印实验结果，用凝胶图像分析系统（gel-proanalyzerversion3.0）分析结果。　　2.3图像分析用图像分析仪900倍放大凋亡和免疫组化切片，每张片随机取10个视野，测定阳性染

7、色的平均吸光度与阳性细胞百分比，计算细胞凋亡指数(ai)。　　2.4统计方法所有数据用spss11.5软件处理。数据以±ｓ表示。多组间比较用方差分析,两两比较用ｑ检验,率检验用χ2分析。　　3结果　　3.1桂枝对mrl小鼠心肌组织dna凋亡ladder发生率的影响空白对照组mrl小鼠通过dna琼脂糖电泳可见凋亡ladder的发生率明显较其它组高。桂枝组和强的松组心肌细胞凋亡ladder的发生率明显下降，两组与空白对照组相比经χ2检验，ｐ<001，差异有显著性。见表1。表1各组小鼠心肌细胞dna凋亡ladder发生率的比较（略）　　3.2桂枝

8、对心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响空白对照组mrl小鼠凋亡指数和m-caspase3基因表达较高，与之相比，桂枝组和强的松组的心肌细胞凋