cpg odn增强乙肝疫苗免疫反应的研究的论文

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1、CpGODN增强乙肝疫苗免疫反应的研究的论文作者：戴帆，董斌，郭晓磊，石碧珠，方丽娟，莫家琳，田素娟，孟民杰【摘要】　　目的研究人工合成的cpgodn对乙肝表面抗原的免疫增强效应，评价cpgodn的佐剂效应。方法将不同剂量特定的cpgodn与乙肝表面抗原联合免疫小鼠，用elisa检测小鼠乙肝表面抗体的滴度。结果cpgodn联合乙肝表面抗原免疫小鼠，在短期检测中，高剂量组能较快的达到检测阈，各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性(p<0.05)，在长期检测中，各剂量组间抗体滴度检测值差异有显著性(p<0.05)，检测值随cpg剂量的增高而增大。结论cpgo

2、dn增强乙肝表面抗原的免疫反应短期和长期都具有剂量效应。【关键词】cpgodn乙肝表面抗原免疫佐剂体液免疫　abstract:objectivetoinvestigatetheeffectsofimmunologicalenhancementofhbsagethodsmicesofmicemunizethebalb/cmice,thehighdosegroupcouldbedetectedquicklyinshotterm,thelevelsofantibodiesingroupsthelevelsofantibodiesingroupsmunologicale

3、ffectofhbsags.　　keymunoadjuvant;humoralimmunity　　cpg基序是一种具有非特异性免疫刺激能力的dna序列，为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列。.cOmcpgodn(unmethylatedcpgmotifbasedoligodeoxynucleotide)是人工合成的含未甲基化cpg基序的寡核苷酸序列。cpgodn可刺激人类和多种动物产生自然免疫和获得性免疫，主要通过tlr9信号系统活化免疫系统，最终促使多种免疫细胞的成熟分化和增殖，包括b淋巴细胞、t淋巴细胞、nk细胞、单核细胞、巨噬细胞和dc细胞。cpgod

4、n能快速活化t、b细胞，诱导th1型免疫反应并能促进抗原递呈细胞的增生和成熟[1]。现阶段我国对乙型肝炎的预防主要是通过注射乙型肝炎疫苗，但接种免疫过程中和接种免疫后会出现免疫较弱和不免疫现象[2,3]。所以，选择一种安全有效的免疫佐剂是增强免疫效果的有效途径。本文通过测定不同时间段的小鼠注射cpgodn和乙肝表面抗原后的抗体滴度，评价cpgodn作为免疫佐剂增强乙肝疫苗的免疫效果。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物balb/c小鼠，雄性，6周龄，体质量18～22g，spf级，购自中山大学实验动物中心，许可证号：scxk(粤)20040011。　　

5、1.1.2试剂血源性乙肝表面抗原购自上海前尘生物，cpgodn由本实验室保存。　　1.2动物分组及免疫方案　　1.2.1动物分组50只balb/c小鼠根据随机分配表，随机平均分成5组：第1组为hbsag和高剂量cpgodn联合免疫组，第2组为hbsag和中剂量cpgodn联合免疫组，第3组hbsag和低剂量cpgodn联合免疫组，第4组为hbsag单用组，第5组为生理盐水对照组。各组饲养条件相同。　　1.2.2动物免疫分别于第0、2、4周免疫balb/c小鼠，每次免疫剂量相同。第1组：尾静脉注射含2μghbsag和100μgcpgodn生理盐水溶液，100

6、μl/只;第2组：尾静脉注射含2μghbsag和1μgcpgodn生理盐水溶液，100μl/只;第3组：尾静脉注射含2μghbsag和10ngcpgodn生理盐水溶液，100μl/只;第4组：尾静脉注射含2μghbsag生理盐水溶液，100μl/只;第5组：100μl生理盐水/只。　　1.3乙肝表面抗原检测　　1.3.1血清采集断尾后玻璃毛细管采血，室温自然凝固，常温离心后取上清，-20℃保存。　　1.3.2抗原检测96孔板用碳酸氢钠缓冲液(15mmol/lna2co3，355mmol/lnahco3，ph9.6)适当稀释的乙肝表面抗原包被，4℃过夜孵育。用含

7、tol/lpbs,0.1%tin，每孔加入100μl经pbs(0.1mol/lpbs,1%bsa)适当稀释的待测血清，37℃孵育90min。pbs洗涤5次，每孔加入100μl　　1000倍稀释的hrp标记的乙肝表面抗原，37℃孵育40min。pbs洗涤5次，每孔加入100μltmb底物(含0.1mg/ml3’3’5’5’四甲基联苯胺的磷酸盐柠檬酸缓冲液，ph5.4，用前加5ml30%h2o210ml)，37℃孵育1h。每孔加入100μlh2so2(0.2mol/l)终止显色反应。biorad680测定a450/630读数。　　1.4统计学分析　　应用spss

8、统计软件，