口虾蛄提取物对体外人鼻咽癌细胞转移潜能的影响

《口虾蛄提取物对体外人鼻咽癌细胞转移潜能的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、口虾蛄提取物对体外人鼻咽癌细胞转移潜能的影响：顾帝水孔霞陈锦黄培春【摘要】　　目的探讨口虾蛄提取物对体外人鼻咽癌细胞系E-2Z转移潜能的影响。方法用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验及侵袭实验检测口虾蛄提取物对E-2Z细胞粘附、运动及侵袭能力的影响；免疫细胞化学法检测其对MMP-2、MMP-9及CD44v6蛋白表达的影响。结果口虾蛄提取物能以量-效方式抑制E-2Z细胞体外运动及侵袭能力（P＜0.01），但对E-2Z细胞-基质粘附能力无影响（P＞0.05）。且口虾蛄提取物能降低MMP-2、MMP-9及CD44v6蛋白强阳性表达率（P＜0.01）。结论口虾蛄提取物可抑制体外E-2Z细胞

2、的运动及侵袭能力,其机制可能与下调CD44v6、MMP-9和MMP-2蛋白表达有关。【关键词】口虾蛄　口虾蛄提取物　鼻咽肿瘤　肿瘤转移近年来，研究发现海绵、海藻及珊瑚等多种海洋生物均含丰富的抗瘤活性物质［1］，提示从海洋生物筛选抗肿瘤新药具有广阔的前景。口虾蛄(Oratosquilla)，又称濑尿虾，属于节肢动物门，是日常食用的海洋生物之一。目前，有关口虾蛄抗肿瘤的报道甚少。本课题组近年研究发现口虾蛄提取物能抑制人低分化鼻咽癌细胞系E-2Z的生长［2，3］，但能否抗肿瘤侵袭及转移尚不清楚。本文旨在探讨口虾蛄提取物对E-2Z细胞转移潜能的抑制作用，为口虾蛄抗肿瘤作用提供实验依据。　

3、　1材料新鲜口虾蛄购于广东湛江港口，Matrigel（BectonDickinsonLabanFibronctin（BectonDickinsonBiosciences,USA),TransmDiameter，8.0μmPoreSize，CorningCosterCorporation,USA)，鼠抗人MMP-2、MMP-9、CD44v6单克隆抗体、超敏广谱S-P试剂盒（KIT-9710）及DBA显色剂（DAB-0031）为福州迈新生物技术公司产品。E-2Z为人低分化鼻咽癌细胞系,由广东医学院肿瘤研究所提供。　　2方法　　2.1口虾蛄有效成分提取与配制新鲜口虾蛄暴晒干后粉碎成粉

4、末，用95%乙醇浸泡3次，每次浸泡液过滤混匀在56℃蒸发提纯。提纯物呈膏状，每克药物相当于生药3.81g。提取物用二甲基亚砜（DMSO）配成1000g·L-1，4℃保存，临用时用培养液稀释成所需浓度，以下实验均分4组：溶剂对照组、口虾蛄提取物低浓度组（200.0mg·L-1）、口虾蛄提取物中浓度组（400.0mg·L-1）及口虾蛄提取物高浓度组（800.0mg·L-1）。　　2.2细胞-基质粘附实验Matrigel按2.0μg/孔铺于96孔培养板中，风干过夜。E-2Z细胞常规培养，以每孔4×104/100μl接种，并加入不同浓度的口虾蛄提取物，每组设12个平行孔，培养8h后倒掉培

5、养液，结晶紫100μl/孔染色10min，PBS洗涤3次。加入醋酸乙醇100μl/孔，酶标仪测定A570nm值。实验重复2次。　　2.3细胞侵袭及运动实验Transl纤维粘连蛋白的完全培养液（600μl/孔）。收集E-2Z细胞，用含1%牛血清白蛋白的RPMI1640制成1×106/ml细胞悬液，以100μl/室加入上室腔，同时加入不同浓度的口虾蛄提取物，每组设平行小室3个，小室浸于24孔板的条件培养基中培养24h，取小室，甲醇∶丙酮（1∶1）固定10min，擦去未穿膜的细胞，HE染色，光学显微镜下随机选择5个视野，计数细胞数目，取均值。运动试验除不铺Matrigel外，其余步骤相

6、同。　　2.4免疫细胞化学法①E-2Z细胞接种在一次性塑料培养皿中，同时加入不同浓度的口虾蛄提取物，常规培养24h后弃培养液，用PBS冲洗3次，冷丙酮：甲醇（1∶1）固定10min，晾干。②免疫组化染色：参照S-P试剂盒说明。③结果观察：每组选用上下左右中五个区域，记数500个细胞，胞浆或和胞膜着色淡黄为弱阳性（+），着色棕黄为阳性（++），着色棕褐为强阳性（+++），无着色为阴性（-）。　　2.5统计学分析用统计学软件SPSSforWindow11.5中单因素方差分析One-WayANOVA(PostHocTest:LSDtest)及R×CTableDescriptivesta

7、tistics(Crosstabs,Chi-square)。　　3.3细胞侵袭实验结果随口虾蛄提取物浓度的增高，穿PVPF膜的细胞数也渐减少（见图2），呈量-效关系。溶剂对照组及口虾蛄提取物低、中、高浓度组侵袭细胞数分别为（102.27±3.91），（54.82±4.39），（45.60±2.03）及（38.47±2.48）。组间差异有显著性（P＜0.01)。　　3.4免疫细胞化学法结果E-2Z细胞CD44v6主要在细胞膜上表达，均呈阳性或强阳性表达。随口虾蛄提取物浓度的增高CD