壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响

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1、壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响：沈力，闫石，吴祁生，吴士良【摘要】目的：观察中药壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基转移酶表达的影响,探讨中药多糖在肿瘤预防和治疗的应用。方法：以浓度为50,100和200mg/L的壳聚糖分别作用于肝癌细胞株SMMC7721和肺癌细胞株A549,采用RTPCR方法检测多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAcT2）和β3GalT7的表达水平。结果：肝癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7仅微弱表达,加药后作用不明显；肺癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7均有所表达，加入不同浓度的壳聚糖之后

2、，ppGalNAcT2和β3GalT7的表达均受到抑制，且随着壳聚糖浓度的增加，抑制作用越明显。结论：肝癌细胞株SMMC7721和肺癌细胞株A549ppGalNAcT2和β3GalT7的表达不同，壳聚糖能够抑制肺癌细胞株A549中的糖基转移酶ppGalNAcT2和β3GalT7的表达，从而抑制了糖基化作用，对肺癌的预防和治疗具有一定的价值。【关键词】壳聚糖；肝癌；肺癌；糖基转移酶［Abstract］Objective:Toobservetheeffectofchitosantotheexpressionofdifferentglycosyltrans

3、ferasesinlivercancercelllineandlungcancercelllineandtostudytheapplicationofchitosaninpreservationandtreatmentoftumor.Methods：DetecttheexpressionofppGalNAcT2andβ3GalT7inSMMC7721celllineandA549celllinebyRTPCRafterchitosanaddedtotheculturemedium.Theconcentrationofchitosang/L.Resu

4、lts：ThemRNAexpressionofppGalNAcT2andβ3GalT7RNAexpressionofppGalNAcT2andβ3GalT7inA549celllineedium.Astheincreasedofconcentration,theinhibitionentoflungtumor.［Keym孔径的滤膜过滤除菌,4℃放置备用。SMMC7721和A549用含10％小牛血清的RPMI1640培养基，置37℃，5％CO2培养箱内培养，生长至对数生长期时进行细胞分组。细胞分成4组，第1组，即对照组，加入1ml的培养基；第2组，加

5、入等体积50mg/L的壳聚糖；第3组，加入等体积的100mg/L的壳聚糖；第4组，加入等体积的200mg/L的壳聚糖。然后加入相同体积的培养基继续培养24h。1.3RTPCRRTPCR法检测SMMC7721和A549细胞中ppGalNAcT2，β3GalT7的表达：将培养瓶中的细胞用PBS洗2次,1500r/min离心5min后弃上清,保留细胞,Trizol法提取总RNA。取总RNA2μg进行逆转录反应,再进行PCR扩增。扩增产物以2%的琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,图像分析仪摄像并分析结果。PCR反应体系(50μl),反应条件：94℃预变性3m

6、in；循环：94℃变性45s,56℃复性1min,72℃延伸1min,循环数30；72℃延伸7min。引物设计采用Geyx软件,并经GenBankBlast进行同源检索后合成。引物由上海Invitrogen公司合成：βactin引物为：F：5′CTCGTGCTACTCTCTCTTTC3′，R：5′CATGTCTCGATCCCACTTAAC3′，预期扩增产物长度为211bp。ppGalNAcT2引物为：F：5′GAAAGAATTAGGAAGGGTCAGAAC3′，R：5′CTGTGTCAATGTAAACATAGCTC3′，预期扩增产物长

7、度为668bp。β3GalT7引物为：F：5′TATGTGCCCGAGTCCTTCTTCG3′，R：5′GCAGTTGTTTCCAGAGCCGAATG3′，预期扩增产物长度为303bp。2.2不同浓度壳聚糖对肺癌细胞株A549ppGalNAcT2和β3GalT7表达的影响肺癌A549细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7均有表达，且随着壳聚糖浓度的增加，表达量均有所降低。说明壳聚糖对ppGalNAcT2和β3GalT7的表达有一定程度的抑制作用。见图2，图3。3讨论所有生物的细胞表面均覆盖着反映细胞种类和状态的糖链。细胞癌变过程中总伴有糖

8、链结构的改变，导致构成癌细胞膜的糖脂质和糖蛋白改变，而糖链的改变又使细胞间的识别和联系发生障碍