苦胆草对斯氏狸殖吸虫致大鼠肝纤维化中timp1表达的影响

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1、苦胆草对斯氏狸殖吸虫致大鼠肝纤维化中TIMP1表达的影响：屈朝霞，马朝东，王文林【摘要】目的：探讨苦胆草对斯氏狸殖吸虫肝纤维化大鼠肝脏TIMP1表达的影响。方法：将42只SD大鼠随机分为正常组，模型组，γ干扰素组和苦胆草组。用斯氏狸殖吸虫感染大鼠制备肝纤维化模型，12周后取肝脏用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测肝组织中TIMP1mRNA的表达。结果：与正常组比较，模型组大鼠肝组织TIMP1mRNA显著升高(P<0.05);与模型组比较，γ干扰素组和苦胆草组大鼠肝组织TIMP1mRNA的表达显著降低(P<0.05)。结论：苦

2、胆草的抗肝纤维化作用可能与其降低TIMP1表达有关。【关键词】苦胆草;肝纤维化;斯氏狸殖吸虫;基质金属酶抑制因子1　[Abstract]Objective:ToexploretheeffectsofgentianascabrabageontheexpressionofhepaticTIMP1inParagonimusskrjabiniinfectedratsalparinggroup，modelgroup,interferonγgroup,gentianascabrabagegroup.UseParagonimusskrjabiniinfectedrats

3、,madethemintoliverfibrosismodel.TheratsRNAplesalgroup,theexpressionofTIMP1mRNAinthemodelgroupexpresslyraised(P<0.05).Hoodelgroup,theexpressionofTIMP1mRNAintheinterferonγgroupandthegentianascabrabagegroupentcouldreducetheTIMP1significantlyinParagonimusskrjabiniratsusskrjabini;ti

4、ssueinhibitorofmetalloproteinase1　　近年来，随着医学分子生物学技术的应用，人们对肝纤维化发生机制进行了深入而广泛的研究，明确提出了肝纤维化完全有可能逆转的论点，国内外许多学者都在积极探索肝纤维化治疗的有效方法。苦胆草又名龙胆和草龙胆，性味苦、寒，是一种广、毒副作用少的常用中草药，主要有效成分是龙胆苦甙。现代药理研究证明,龙胆苦甙具有显著的肝脏保护、抗炎、抗病原微生物、中枢兴奋及健胃利胆等作用。本课题组前期研究表明龙胆苦甙对肝细胞有保护作用。本研究旨在探讨在大鼠肝纤维化形成过程中苦胆草对肝纤维胶原降解中关键酶TIMP1蛋白表达的

5、影响。　　1材料与方法　　1.1动物　　SD大鼠42只,体质量(160±10)g,购自昆明医学院实验动物中心。　　1.2药品及试剂　　DNA标准参照物DL2000(宝生物工程)，DNA上样缓冲液(宝生物工程)，Trizol试剂(MolecularResearchCenter)，RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(Fermentas)，PCRMasterMixKit(Fermentas)，注射用重组人干扰素γ(上海克隆生物高技术有限公司)，苦胆草原粉由昆明医学院天然药物重点实验室提供。　　1.3方法　　1.3.1动物模型的建

6、立　　每组每鼠经腹腔感染斯氏狸殖吸虫囊蚴15个。实验时将自溪蟹体内分离出来的新鲜囊蚴于解剖镜下计数，然后用生理盐水反复冲洗干净，再将实验动物腹部朝上固定剃毛消毒，用卡介苗注射器接大号针头，吸取己计数的囊蚴生理盐水混悬液注入腹腔，待囊蚴注入后留置针头，再吸取生理盐水边回抽边注射，力求囊蚴全部注入。　　1.3.2实验分组及处理方法　　将大鼠随机分为4组：①正常组(10只),不做任何处理;②模型组(12只),于感染后8周剖杀2只大鼠，取其肝脏验证造模是否成功，余不做任何处理;③苦胆草组(10只)，自感染后8周起,先给予三氯苯达唑杀虫治疗4天，然后给予苦胆草灌胃治疗。剂量

7、为3.2g·kg-1·d-1,连续4周,治疗结束后剖杀大鼠取其肝脏;④γ干扰素组(10只)，以γ干扰素替代苦胆草治疗，皮下注射γ干扰素15万单位·(只·天)-1，其余均与苦胆草组相同。取肝脏，用RTPCR方法检测肝组织中TIMP1mRNA表达量。　　1.3.3肝脏病理学检查　　取同一部位的肝组织用10%甲醛液固定，常规脱水，石蜡包埋、切片，进行VG胶原染色，观察肝纤维化的程度。　　1.3.4半定量RTPCR法检测TIMP1mRNA表达　　采用逆转录-聚合酶链反应法(RTPCR)严格按照试剂盒说明书操作[1]。①引物序列，由大连宝生物工程公司合成。β

8、肌动蛋白