含中药龙血竭的血清处理方法研究

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1、含中药龙血竭的血清处理方法研究【关键词】龙血竭；含药血清；蛋白沉淀　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthetreatmentofserumofrabbitsfedsamples.HPLCinethetargetsubjects.Fivechemicalsandtheircharacteristicpeaksentprocessoftheserum.ResultsTheaveragerecoveryofDracaena’smajorponentsreached8

2、0%afterprecipitatedbyacetonitrilefirstandthenextractedbyethylacetate.ConclusionThemethodprovidesareliableapproachtopreparetheserumcontainingDracaena.　　Key；proteinprecipitation　　龙血竭为传统中药,是龙舌兰科植物剑叶龙血树［Dracaenacochinchinensis(Lour)S.C.Chen］含树脂木材的乙醇提取物［1］。龙血竭总

3、黄酮（sanguisdraconisflavones,SDF）是从龙血竭中提取得到的主要成分［2］，包括黄酮、二氢黄酮、黄烷、查耳酮、二氢查耳酮等20多种化合物［3］。动物实验表明，龙血竭总黄酮能对抗整体动物心肌缺血损伤［2］。本实验将龙血竭HPLC图谱中特征峰较明显的5个成分的峰面积作为检测指标（其中2个主要成分为龙血素A和龙血素B），以龙血竭原溶液为对照计算体外加样后提取百分率，进行血清处理方法的研究。　　1仪器与试剂　　　　onsilC18（5μm,250mm×4.6mm）；保护柱：Easyguard

4、C18ReplacementCartridgesCat#6101；流动相：乙腈1%冰醋酸（体积比38∶62）；检测波长：280nm；流速：1.2mL/min。　　2.2溶液的制备　　　　取龙血素A、龙血素B对照品适量，用甲醇分别配制成每1mL含10μg的溶液，作为对照品溶液。　　　　取广西龙血竭，用甲醇配制成每1mL含2mg的溶液，0.45μm微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。　　2.3线性范围　　　　将龙血素A对照品溶液分别配制成浓度为0.925、4.625、9.250、13.875、18.500、2

5、3.125μg/mL的溶液，进样10μL,记录色谱图，进样量（m）与峰面积（A）的回归方程为：A=45064451m-10379768，r=0.9992，线性范围为9.25～231.25ng。　　　　同上，将龙血素B对照品溶液分别配制成浓度为0.947、4.735、9.470、14.205、18.940、23.675μg/mL的溶液，进样10μL,记录色谱图，进样量（m）与峰面积（A）的回归方程为：A=33227615m-10135858，r=0.9990，线性范围为9.47～236.75ng。　　2.4稳

6、定性试验　　　　取“2.2”项下的供试品溶液分别于0、2、4、6、8、24h进行检测，分别记录5个特征性成分的峰面积，相应峰面积的RSD值分别为1.83%、3.09%、2.89%、2.47%、2.05%，即供试品溶液在24h内保持稳定。　　2.5供试品溶液HPLC图谱　　　　取“2.2”项下的供试品溶液，龙血素A、龙血素B对照品溶液及空白血清样品，各进样10μL，记录HPLC图谱，见图1。　　　　图1供试品溶液（A）、龙血素A对照品(B)、龙血素B对照品(C)及空白血(D)HPLC图谱　略　　　　含中药龙血

7、竭的血清处理方法研究在供试品溶液图谱上选取5个特征峰较明显的成分作为检测指标，保留时间分别为10.232、15.498、26.665、35.732、38.732min，其中峰4和峰5经验证，确定为龙血素A(4′羟基2,4二甲氧基二氢查耳酮)和龙血素B（4′羟基2，4，6三甲氧基二氢查耳酮）［4］，峰1、2和3结构未知。由上图可知，空白血清样品无干扰。　　3结果与讨论　　3.1提取率的计算　　特征性成分的提取率=血清样品中特征性成分的峰面积/供试品溶液相应成分的峰面积×100%　　表1不同蛋白沉淀

8、剂制备含药血清的特征峰的提取率略　　　　从表1可见，以甲醇作蛋白沉淀剂对5个特征峰的提取率均较低，丙酮次之，乙腈和无水乙醇相对高一些，但对峰3的提取率均低于50%，证明4种处理过程均无法避免血浆蛋白对药物的吸附，无法达到理想的提取效果。　　　　按上述实验步骤，在分别加入蛋白沉淀剂后，加入与血样同等量的乙酸乙酯，提取3次，涡旋混合，离心，取乙酸乙酯层，合并提取液，水浴挥干，精密加入1mL甲醇，超声溶解，经0.2μm