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时间:2018-05-05
《急性髓细胞白血病flt3itd基因突变的检测及其临床意义》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、急性髓细胞白血病FLT3ITD基因突变的检测及其临床意义:尹列芬,王晔,姚锦,黄桂云,瞿晓媛,杨玲【摘要】目的探讨急性髓细胞白血病(acutemyeloidleukemia,AML)患者人Fms样酪氨酸激酶3内部串联重复(Fmsliketyrosinekinase3intenaltandemduplication,FLT3ITD)基因突变及其临床意义。方法采用聚合酶链反应变性高效液相色谱(polymerasechainreactiondenaturinghighperformanceliquidchromatography,PCRDHPLC)方法检测60例初治AML
2、患者和10例对照组骨髓FLT3ITD基因突变。结果60例AML患者FLT3ITD突变阳性率21.67%(13/60),10例对照组均未检测到该突变;FAB各亚型FLT3ITD突变率不同,有M3型突变率较高的趋势;FLT3ITD阳性组外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高于FLT3ITD阴性组(P<0.01);FLT3ITD阳性组完全缓解(CR)率低于FLT3ITD阴性组(P<0.05)。结论FLT3ITD基因突变多见于M3患者,FLT3ITD阳性者具有外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高、CR率低的特点。FLT3ITD基因突变可作为预测AML预后的一
3、个指标。【关键词】急性髓细胞白血病;FLT3;内部串联重复;基因;聚合酶链反应变性高效液相色谱技术 ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethemutationofFLT3internaltandemduplication(ITD)inpatientsyeloidleukemia(AML)anditsclinicalsignificance.MethodsThemutationofFLT3ITDinbonemarroplesfrom60patientserasechainreactiondenaturinghighperformanceliquid
4、chromatography(PCRDHPLC).ResultsThereutation,utationrate,andM3hadanobviouslyhighermutationratethanothersubtypes.TheperipheralarroutationthaninthoseissionrateutationthanthoseutationislikelytooccurinM3ofAMLpatients.FLT3ITDmutationisassociatedarroissionrateparedutation.ThedetectionofFLT3ITDmu
5、tationmaybeusedasanindexofAMLprognosis. KEYL)时,于1996年首先报道。为探讨AML患者FLT3ITD的突变情况,我们采用聚合酶链反应变性高效液相色谱(polymerasechainreactiondenaturinghighperformanceliquidchroma tography,PCRDHPLC)技术检测60例初治AML患者骨髓FLT3ITD的突变情况并分析其临床意义。 1材料与方法 1.1研究对象60例初治AML患者,诊断及疗效标准参照《血液病诊断及疗效标准》[5]。男27例,女33例,中位年龄48岁(
6、18~79岁)。FAB分型为M03例,M13例,M214例,M313例,M413例,M512例,M62例,M70例。老年AML30例(年龄>60岁),非老年AML30例,正常人及良性血液病患者为对照组共10例(3例健康人,5例缺铁性贫血患者,2例特发性血小板减少性紫癜患者)。 1.2实验方法采用聚合酶链反应变性高效液相色谱(PCRDHPLC)方法。①DNA制备。取患者骨髓液2mL,应用美国Promega公司DNA提取试剂盒抽提总DNA。测定吸光度A260nm/A280nm值,确定DNA的纯度及浓度,并以去离子水稀释DNA样本为1g/L。②PCR扩增。应用PrimerE
7、xpressV2.0软件包以13号染色体外显子14、15设计引物,包括整个近膜区(JM)和激酶结构起始部分,扩增产物为329bp。引物由上海捷瑞公司合成,正义引物:5′GCAATTTAGGTATGAAAGCCAGC3′;反义引物:5′CTTTCAGCATTTTGACGGCAACC3′。PCR反应体系(50μL):10×PCR缓冲液5μL,25mmol/LMgCl26μL,10mmol/LdNTP1μL,10μmol/L正/反义引物各2μL,模板DNA4μL,TaqDNA酶
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