海洋来源真菌af11中吲哚二酮哌嗪类抗肿瘤活性成分的研究

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1、海洋来源真菌Af11中吲哚二酮哌嗪类抗肿瘤活性成分的研究：赵文英张亚鹏朱天骄方玉春刘红兵顾谦群，朱伟明【摘要】对海洋具有抗肿瘤活性的真菌Af11中活性次级代谢产物进行了研究，采用活性追踪的方法从乙酸乙酯提取物中分离得到7个含吲哚基的二酮哌嗪类化合物，根据化合物的光谱特征和理化性质分别鉴定为cycloLtryptophylLproline(1)，NPrenylcycloLtryptophylLproline(2)，tryprostatinB(3)，demethoxyfumitremorginC(4)，fumitr

2、emorginC(5)，cyclotryprostatinsB(6)和fumitremorginB(7)，其中化合物2为新天然产物。利用丽丝胺罗丹明法，对7个单体化合物的抗肿瘤活性进行了初步评价。【关键词】海洋真菌吲哚二酮哌嗪抗肿瘤活性StudiesontheindolyldiketopiperazineanalogsproducedABSTRACTToinvestigatetheantitumorsecondarymetabolitesofmarinederivedfungalAf11.Sevenindolyldiketopipe

3、razinepoundsinedthroughextensiveanalysisof1Dand2DNMRdata.TheirantitumoractivitiesagainstK562celllinesinarilyevaluatedbythelissaminerhodamineBmethod.pound2oractivity由于海洋环境的特殊性，赋予生活在海洋中的真菌在生理性状和遗传背景上与陆生真菌具有显著差异，因此从海洋真菌代谢产物中寻找有效的抗肿瘤先导化合物引起国内、外学者的关注。经过多年的不懈努力，人们已经相继从海洋的真菌中分出

4、许多结构新颖的具有抗肿瘤活性的化合物，其中以生物碱类成分居多。天然产物中的生物碱都是由氨基酸衍生而成的，其中二酮哌嗪类生物碱具有显著生理活性，如由苯丙氨酸和丝氨酸衍生的gliotoxin［1］是一种真菌毒素，具有很强的细胞毒活性和免疫抑制作用；喹唑酮类生物碱fumiquinozolinesAI［2］是由色氨酸和邻氨基苯甲酸衍生的，具有中等强度的细胞毒活性和抗真菌活性等。近年来本实验室利用人慢性髓性白血病细胞(K562)的流式细胞术筛选模型开展了从海洋微生物中寻找新的细胞周期抑制剂和细胞凋亡诱导剂等抗肿瘤先导化合物的研究工作。从海洋样品中

5、分离纯化了近千株微生物菌株，对其发酵产物进行活性筛选。其中从青岛近海海泥样品中分离出真菌Af11的发酵物显示有明显的坏死性细胞毒活性和细胞周期抑制作用，采用活性追踪的分离方法从其活性部位中分离得到７个含吲哚基的二酮哌嗪类化合物。本文主要报道该类化合物的提取分离、结构鉴定和抗肿瘤活性。1材料与方法1.1仪器与试剂质谱用AutospecUltimaTOF型质谱仪，核磁共振谱用日本JEOLJNMECP600型核磁共振仪测定。分析用高效液相色谱仪：illennium32工作站，CapcellPakC18柱：(4.6mm×250mm，5μ

6、m)］。制备用高效液相色谱仪：日本岛津公司产品［LC6AD，SPDM20AVP检测器，SCL10AV型系统控制器，CapcellParkC18柱：(20mm×250mm，5μm)］。柱层析及薄层层析用硅胶H(10～40μm)：青岛海洋化工集团公司。SephadexTMLH20：Pharmacia公司。活性测试采用K562细胞。胎牛血清(FBS)和RPMI1640细胞培养基分别为Hyclone公司(Cat.No.STF721)和Gibcobrl公司产品。丽丝胺罗丹明B((lissaminerhodamineB，SRB)为Sigma

7、公司产品。1.2菌种发酵按培养微生物的常规方法取真菌适量，接种到PDA琼脂固体斜面培养基上，在28℃培养箱中培养7d。用接种针挑取适量孢子和菌体，接种到含100ml种子培养液的500ml三角烧瓶中，置摇床中，在28℃、120r/min条件下培养48h，获得种子培养液。取该种子培养液适量，按5%的接种量接种到内装150ml培养液的500ml三角烧瓶中，置28℃、120r/min的摇床上发酵7d，获得菌株的发酵培养液。1.3菌株提取物的制备将菌株的发酵培养液离心，分为上清液和菌丝体。取上清液，用乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，得上清液的乙酸乙酯

8、萃取液。菌丝体用80%丙酮水溶液超声破碎提取3次，合并提取液，减压浓缩至不含丙酮后，用乙酸乙酯萃取三次，萃取液与上清液的乙酸乙酯萃取液合并，减压浓缩至干，得到该菌株的乙酸乙酯萃取物(粗提物35