毛冬青根中木脂素配糖体提取工艺及纯化鉴定研究

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1、毛冬青根中木脂素配糖体提取工艺及纯化鉴定研究：周中流，邹节明，王力生，曾立，尹文清【摘要】　　目的研究毛冬青总木脂素配糖体最佳提取工艺，并将总木脂素配糖体进行纯化鉴定。方法采用正交实验，考察乙醇浓度、提取温度、固液比及提取时间4个因素对该工艺的影响；利用D101大孔树脂分离纯化毛冬青总木脂素配糖体。结果确定了毛冬青木总脂素配糖体的最佳提取工艺为：提取时间为1.5h，提取温度为80℃，乙醇浓度70%，固液比1∶5；纯化后的总木脂素配糖体经红外光谱初步鉴定与tortosideA对照品都具有木脂素母核的基本

2、结构特征。结论优选出的最佳提取工艺条件及纯化总木脂素配糖体的方法，对进一步的工艺开发有较好的参考价值。【关键词】毛冬青木脂素配糖体提取工艺纯化鉴定　　Abstract:ObjectiveTostudytheoptimumextractionprocessforthetotallignansfromPubescentHollyroot,andlignansperature,ratioofsolidtoliquidandtimeofextractiononthetotallignansextraction

3、rateumextractionconditionperatureof80℃,concentrationofalcohole,theresultshoeconstructurefractions.ConclusionTheoptimumextractionconditionandpurificationexperimentareveryusefulforfurtherdevelopmentofindustrialprocess.　　Keyedioresinoldi-O-β-D-glucopyranos

4、ide、(+)-pinoresinol-4,4'-O-bisglucopyranoside等木脂素成分，都是以木脂素为苷元的配糖体，结构在局部有高度的对称性。据报道［3］它们用来制备补药，能够降压，调节神经系统，增强身体抵抗力，且对血压有双相调节等功效。　　毛冬青根中总木脂素配糖体的提取工艺尚未见报道，本文拟通过正交实验研究毛冬青根中总木素配糖体的最佳提取工艺条件，以总木脂素配糖体提取率为指标，系统地考察了溶剂浓度、固液比、提取时间、提取温度等因素的影响，最后优选出最佳提取方案，并对采用该方案提取的毛

5、冬青总木脂素配糖体进行分离、纯化及鉴定，为本地毛冬青及毛冬青木脂素配糖体的开发利用提供实验数据和理论指导。　　1器材与方法　　1.1材料与试剂　　毛冬青干燥根由广西柳州市中药饮片厂提供，药材经由广西师范大学生命科学院唐绍清教授鉴定为冬青科植物毛冬青IlexpubescensHook.eLAm的干燥根；木脂素配糖体tortosideA对照品系笔者从广西毛冬青根中分离得到的单体，其它试剂均为分析纯。　　1.2仪器　　TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；旋转蒸发仪（上海亚

6、荣生化仪器厂）；电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）。　　1.3方法　　1.3.1样品提取工艺称取毛冬青干燥根粗粉100.0g，按表1所示的正交条件，采用不同体积分数的乙醇加热回流提取，合并所得浸膏加水溶解，依次用石油醚、水饱和的正丁醇萃取，减压蒸干萃取液，干燥得到粗提物用150ml甲醇溶解，作为待测液。　　1.3.2毛冬青干燥根中总木脂素配糖体的定量测定以木脂素配糖体tortosideA为对照品，用分光光度法测定木脂素配糖体含量并计算毛冬青总木脂素配糖体提取率。　　总木脂素配糖体提取率（%）=［

7、(提取液中木脂素配糖体总量)／(所用毛冬青干燥根原料量)］×100%　　1.3.3正交实验选取乙醇浓度、提取温度、固液比及提取时间四因素作L9(34)正交实验，（见表1，2）。并对结果进行方差分析和显著性检验。见表3。表1正交实验因素水平（略）表2L9(34)正交实验结果（略）表3正交实验方差分析（略）　　精确称量木脂素配糖体tortosideA对照品5mg，用无水甲醇溶解并定容至25ml，再依次配制成5，10，15，20，40，80μg/ml的标准溶液，以无水甲醇为空白，在275nm处测定吸光度，回

8、归分析得到标准曲线为Y=0.0214X+0.035，式中Y为吸光度，X为tortosideA含量(μg/ml)，X的取值在5～80μg范围内线性关系良好，相关系数r=0.9989。　　2.1.2毛冬青总木脂素配糖体的提取率测定精确吸取“1.3.1”项下待测液0.2ml并稀释定容至25ml，在275nm处测定吸光度，从而可以得到毛冬青总木脂素配糖体的提取率。结果见表2。　　2.2正交实验的设计及结果用乙醇为溶剂提取的4因素、3水平正交实验因素、水平见表1，