海洋放线菌s1001中抗肿瘤活性成分的研究

《海洋放线菌s1001中抗肿瘤活性成分的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、海洋放线菌S1001中抗肿瘤活性成分的研究：刘睿朱天骄朱伟明李冬崔承彬，顾谦群【关键词】海洋放线菌；,次级代谢产物；,异黄酮；,环二肽；,抗肿瘤活性　　摘要：一株于海泥的放线菌S1001发酵产物具有致细胞坏死活性，本文采用溶剂萃取、硅胶柱层析及制备HPLC等分离手段对该菌株发酵产物的活性部位进行了活性追踪分离，共分离得到8个化合物，通过理化性质及波谱学手段，鉴定其结构分别为4′，5，7三羟基异黄酮(1)，4(2，4二羟基苯酰胺基)苯甲酸(2)，环(甘氨酸丙氨酸)(3)，环(甘氨酸脯氨酸)(4)，环(亮氨酸

2、酪氨酸)(5)，环(缬氨酸亮氨酸)(6)，环(缬氨酸异亮氨酸)(7)，环(苯丙氨酸甘氨酸)(8)。并用SRB法初步评价了化合物1～8的抗肿瘤活性，结果表明化合物4、5和7在10μmol/L浓度时对K562细胞表现出了一定的抑制活性。　关键词：海洋放线菌；次级代谢产物；异黄酮；环二肽；抗肿瘤活性　TheantitumoractiveponentfrommarinederivedactinomyceteS1001　　KEYarineactinomycete;Secondarymetabolites;Isofl

3、avone;Cyclodipeptides;Antitumoractivity海洋微生物由于生活在高盐、高压及寡营养的特殊环境中，具有独特的代谢方式，因此能产生许多结构新颖、活性独特的次级代谢产物。近20年来，有关海洋微生物产生新的活性次级代谢产物的报道逐渐增多，海洋微生物作为活性物质的新正日益被国内外海洋研究工重视。本实验室以小鼠乳腺癌tsFT210细胞为活性筛选模型，对我国青岛沿海采集的海泥样品中分离纯化的微生物菌株进行筛选［1］，得到一株放线菌S1001具有坏死性细胞毒作用。为阐明它的抗肿瘤活性成分

4、，采用活性追踪的方法，对其发酵物进行研究，迄今为止，共分离得到9个化合物，利用理化性质和波谱学方法鉴定了其中8个化合物。本文着重报道化合物1～8的提取分离，结构鉴定及活性研究。1材料与方法1.1试验试剂和仪器熔点用日本Yanaco公司MP500D型显微熔点仪测定(未校正)；质谱用QTOFULTIMAGLOBALGAA076LC型质谱仪，核磁共振谱用日本JEOLJNMECP600型核磁共振仪测定；制备用高效液相色谱仪采用日本岛津公司产品［LC6AD泵，SPDM20AVP检测器，SCL10AV型系统控制器，S

5、hinpakC18柱(20mm×250mm，5μm)，4ml/min］；SephadexLH20和层析用硅胶H(10～40μm)分别为Pharmacia公司和青岛海洋化工厂产品；活性测试采用小鼠温敏型乳腺癌tsFT210细胞；胎牛血清(FBS)和RPMI1640细胞培养基分别为Hyclone公司(Cat.No.STF721)和GIBCOBRL公司产品。磺酰罗丹明B(SRB)为Sigma公司产品。1.2菌株的分离与培养1.2.1产生菌株放线菌S1001从青岛沿海的海泥中分离得到，其发酵液的总提物对小鼠乳腺癌

6、tsFT210细胞表现出坏死性细胞毒活性。1.2.2培养从28℃培养4d的高氏1号培养基上取适量菌体，接种于种子培养基(葡萄糖2%，可溶性淀粉1%，豆粉0.5%，蛋白胨2%，酵母提取物0.4%，牛肉膏0.1%，K2HPO40.05%，CaCO30.2%，陈海水配制，pH值调至7.0)，于28℃，120r/min的条件下摇床培养2d得到种子培养液。将该种子培养液按10%的接种量，接种于150瓶每瓶含100ml液体培养基(成分同上)的500ml三角瓶中，28℃，120r/min摇床培养5d，发酵15L。1.3

7、活性测试1.3.1生物活性测试方法按照文献［2，3］采用SRB(sulforhodamineB，磺酰罗丹明B)法，结合显微镜观察细胞形态变化(顺铂做阳性对照)。1.3.2有效部位的确定取发酵液1ml，减压浓缩蒸干，然后溶于甲醇，该甲醇提取物在1mg/ml的浓度下，显示了强的坏死性细胞毒抗肿瘤活性。将甲醇提取物配制成10mg/ml的蒸馏水混悬液，取混悬液三份分别加入等体积的乙酸乙酯和正丁醇萃取并测试活性。结果表明，只有乙酸乙酯萃取物具有与粗提物相应的生物活性，故确定为有效部位。1.4提取分离培养物用滤纸抽滤

8、，分为上清液和菌丝体两部分。上清液15L浓缩至约5L，等体积乙酸乙酯萃取三次；菌丝体先用80%丙酮提取，提取液浓缩至无丙酮后所得的水相再用等体积乙酸乙酸萃取三次，合并两部分的乙酸乙酯萃取物得总浸膏2.6g。浸膏拌硅胶过柱，以石油醚∶丙酮、氯仿∶甲醇梯度洗脱，收集各馏分，减压浓缩、合并，得到9个色谱组份Fr1～Fr6。每个组分经活性测试，确定Fr3、Fr4和Fr6为活性组分。经反复的正反相硅胶、SephadexLH20柱色谱和高