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1、HLADRB1基因多态性与贵州地区汉族人群结核病的易感性分析【关键词】HLADRB1基因;多态性;易感性;结核病;贵州省StudyontheassociationofthepolymorphismsofHLADRB1genesentofClinicalMicrobiologyandImmunology,HainanMedicalCollege,Haikou571101,China)[ABSTRACT]Objective:TodetermineorphismsoftheHLADRB1geneareassoci
2、atedorphismsoftheHLADRB1geneerasechainreactionsequencespecificprimers(PCRSSP)techniqueamong53healthycontrolsand47tuberculosiscasesofHanpeoplefromGuizhouprovince.Results:ThefrequencyofHLADRB1*16alleleintuberculosiscasesaybeassociatedonarytuberculosisinthisp
3、opulation. [KEYarker购自大连宝生物工程有限公司,HLADRB1PCRSSP分型试剂盒购自美国Lambda公司。 1.3 标本采集 静脉采血约2～3mL,用EDTA.Na2抗凝备用。 1.4 DNA提取 采用DNA抽提试剂盒严格按说明书操作。提取的DNA用紫外分光光度计测定浓度和纯度,A260/280nm应在1.6～1.8,DNA浓度在80ng/μL,抽提的DNA于20℃保存备用。 1.5 PCRSSP分析HLADRB1基因多态性 按试剂盒说明操作,对抽提的DNA样本进行P
4、CR扩增。扩增条件:96℃预变性150s;96℃变性15s，65℃复性60s，共10个循环;95℃变性15s，62℃复性50s，72℃延伸30s,共22个循环。取PCR扩增产物于2%琼脂糖凝胶上100V稳压电泳1h，于凝胶成像仪观察结果,按试剂盒提供的基因电泳格局图确定基因位点。 1.6统计学处理 患者组与正常组之间基因频率差异分析采用χ2检验,当1≤T<5,但n≥40时,用连续性校正检验;当T<1或n<40时,用Fisher精确检验。P<0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1
5、 PCRSSP分析HLADRB1基因多态性 根据各PCR产物是否扩增出目的片段综合判定HLADRB1基因型,如图1显示该例基因型为HLADRB1*04/15。 2.2 等位基因HLADRB1基因频率的比较 HLADRB1基因共出现13个位点,基因频率见表1。在53例正常对照组的HLADRB1等位基因中,DRB1*03、DRB1*08、DRB1*09、DRB1*11及DRB1*12等位基因频率较高;而DRB1*01、DRB1*04、DRB1*15及DRB1*16等位基因频率较低。在47例结核病患者
6、的HLADRB1等位基因中,DRB1*04、DRB1*08、DRB1*09、DRB1*14及DRB1*16等位基因的频率较高;而DRB1*01、DRB1*11及DRB1*12等位基因频率较低。其中DRB1*16等位基因频率明显高于正常对照组(P<0.05);DRB1*11等位基因频率明显低于正常对照组，(P<0.05),其他差异无统计学意义。表1病例组与正常对照组HLADRB1等位基因频率分布 3讨论 大量研究表明，结核病的发生不仅与环境因素有关，还与机体的遗传因素密切相关。不同种族人群携带的不
7、同基因可能影响结核病的易感性[2]。HLA复合体作为人体最复杂的基因系统，与结核病的相关性越来越受到研究者的重视，尤其是其中的HLADRB1等位基因更成为研究的重点。但关于HLADRB1等位基因与结核病易感性的相关性研究结果不尽相同，这也表明不同种族人群中易感基因是有差别的。本文旨在研究中国汉族人群HLADRB1等位基因与结核病易感性的相关性，通过对47例贵州地区汉族结核病人及53例正常对照的研究发现，病人组中DRB1*16等位基因频率明显高于正常对照组(P<0.05);而DRB1*11等位基因频率明显
8、低于正常对照组，(P<0.05)。说明DRB1*16等位基因可能为中国汉族人群结核病的易感基因，DRB1*11等位基因可能为结核病的保护性基因。这与刘志辉[3]等报道的中国南方汉族人群结核病的易感基因为DRB1*16是一致的，但保护性基因却不同，刘志辉[3]等报道的为DRB1*13.3及DRB1*01,而本研究结果为DRB1*11，说明易感基因与保护基
