皱瘤海鞘正丁醇部位体外抗乙肝病毒的初步研究

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1、皱瘤海鞘正丁醇部位体外抗乙肝病毒的初步研究【摘要】目的对皱瘤海鞘正丁醇部位进行抗乙肝药效筛选。方法应用酶联免疫技术(ELISA)测定血清中病毒与药物反应12h前后表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)的OD值变化，评价皱瘤海鞘正丁醇部位抗乙肝病毒(HBV)的活性。结果在药物浓度大于6mg/ml时，给药组与对照组中HBsAg，HBeAg的OD值在统计学上有显著性差异（P<0.05），提示皱瘤海鞘正丁醇部分有明显的抗HBsAg和HBeAg作用。结论初步提示皱瘤海鞘正丁醇部位对乙肝病毒有抑制、破坏作用。.L.编辑。【关键词】皱瘤海鞘抗乙肝病毒酶联免疫技术　　Abstract:Obj

2、ectiveToscreenouttheanti-HBVeffectivepartsextractedfromStyelaplicatausingn-butanolassolvent.MethodsTheODchangesofHBsAg，HBeAginserumaddeddrugeasuredbyELISAin12h,andantiHBVeffectivepartsfromStyelaplicataaddeddrugandnon-drugteam(P<0.05)inconcentrationabove6mg/ml.ThepartsextractedfromStyelaplicat

3、ausingn-butanolrevealedanti-HBsAgandanti-HBeAgeffects.ConclusionThen-butanolpartsofStyelaplicatahaveantiHBVeffect.　　Keyl双蒸水尽量溶解，用等体积水饱和正丁醇萃取，并浓缩蒸干，得正丁醇初提物4.3g。　　2.2体外抗HBeAg筛选将“大三阳”血清（血清中同时含有HBsAg和HBeAg)分别以50μl/孔加入96孔板内，另取以上实验得到的正丁醇部位，用生理盐水配制成12mg/ml的母液，并相应稀释成2，4倍，即为6，3mg/ml。每个浓度各50μl加入于96孔板中，每个5

4、孔，分别与血清在37℃恒温箱中作用12h后取出，按照试剂盒中说明书操作，于450nm/630nm双波长测定各孔血清中HBeAg的OD值。实验另设不加药加生理盐水50μl/孔做阳性对照组，同时以正常人血清按相同条件与生理盐水作用的反应液为阴性对照，以生理盐水为空白对照。　　2.3体外抗HBsAg筛选同2.2项下操作，只是将带毒血清换成“小三阳”血清（即血清中仅含有HBsAg）。　　3结果　　采用∑960酶标仪测定各组OD值，运用SPSS10.0软件进行方差分析，可知正丁醇部位对带病毒血清中HBeAg，HBsAg有无抑制作用（见表1）。抑制率=（阳性对照OD值-给药组OD值）/（阳性对照OD

5、值-阴性对照OD值）　　从表1看出，正丁醇部位浓度在12，6mg/ml时，药物组与对照组OD值有显著性差异（P<0.05），HBeAg抑制率分别是90.11%，73.63%，HBsAg为58.33%，41.67%，说明药物对HBeAg，HBsAg均有抑制作用；在3mg/ml时，仅对HBsAg有抑制作用（抑制率29.63%），而HBeAg没有抑制作用。　　表1皱瘤海鞘正丁醇部位不同浓度对HBeAg，HBsAg的作用（略）　　药物不同浓度组与HBeAg阳性对照组比较，*P<0.05；药物不同浓度组与HBsAg阳性对照组比较，**P<0.05　　4讨论　　从表1中得到的结果提

6、示，皱瘤海鞘正丁醇部位在体外对血清中的HBeAg，HBsAg有明显的直接破坏作用，具有一定的抗乙肝药效，该提示为进一步分离、提取正丁醇部位中有效单体成分提供了药效指引。我们对正丁醇部位进行了成分预实验，发现该部位有辛辣味，并且Liebermann-Burchard反应呈阳性，提示其中可能含有皂苷类成分，需要进一步进行分离提取。　　抗乙肝有效成分的体外筛选方法有很多［4，5］，国内常利用转染HBV病毒基因的2.2.15细胞进行体外筛选，但该种方法操作较复杂，对环境要求比较严格，且实验周期较长，而本文所采取的方法具有操作简单、实验时间短的优点，适合于大批量地进行体外抗乙肝药物的初步筛选。本方

7、法也有一定的局限性，只能提示正丁醇部位在体外具有抑制乙肝病毒的药效，并不能说明其抗乙肝的作用机制，只能对分离提纯提供初步的药效指引。【参考