中药验方拮抗肾小球硬化进展的研究

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1、中药验方拮抗肾小球硬化进展的研究作者：叶学锋王毅谭亿民易晓颖陈彤仝崇毅【关键词】肾小球硬化【摘要】目的探讨中药验方延缓5/6肾切除大鼠肾小球硬化的作用。方法随机将动物分为空白对照组，5/6肾切除大鼠模型对照组和中药观察组;分别于手术后4周、8周检测各组大鼠血红蛋白、血肌酐和24h尿蛋白含量;Masson、过碘酸-Shiff（periodicacidShiff，PAS）和免疫组化染色结合图像分析系统半定量观察肾小球内胶原纤维、肾小球基质、层粘连蛋白（LN）及Ⅳ型胶原（ColⅣ）的积分光密度（IOD）。结果与模型组比较，中药观察组可减少血肌酐上升程度（P<0.05）和24h尿蛋白量（P<

2、;0.05）。并随着时间延长而显示出延缓了血肌酐上升速度的趋势（P>0.05）。肾小球内基质、胶原纤维、CollagenⅣ、LN的病理性聚集的减少具统计学意义（P<0.05～0.01）。结论中药验方能拮抗大鼠肾小球硬化和慢性肾衰进展速度。关键词肾小球硬化5/6肾切除植物/药用免疫组织化学【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofpreventingprogressofglomerularsclerosisbytheChinesemedicineinraty.MethodsTheratsisedintoChinesemedicinetre

3、atmentgroup，controlgroupandnormalcontrolgroup.hemoglobin，serumcreatinine（SCr）and24hurinaryprotEineasuredat4thand8thy.Renalpathologychangesetime.TherenaltissuesmunohistochemicalandMassonandperiodicacidShiffmethods.Thenintegraopticaldensit（IOD）ofglomerularextracellularmatrix，Collagenfibrin，LNandCollag

4、enⅣi-quantifiedbyimageanalysissystem.ResultsInparisonedicinegroup（P<0.05），andtheseresultserularextracellularmatrixes，Collagenfibrin，LNandCollagenⅣedicinegroup（P<0.01）.ConclusionThisChinesemedicinecandelaytheprogressofglomerularsclerosison5/6nephrectomizedrats.Keyerularsclerosis5/6kidneyexcisio

5、nplants/medicineimmunohistochemical慢性、进行性肾损害的肾脏结构和功能改变，导致了机体代谢紊乱和临床慢性肾功能衰竭综合征。防治或延缓其进展到慢性肾功能衰竭终末期的速度，是目前临床医学关注的焦点之一。长期临床实践中，中医使用扶正固本、活血化瘀等治疗慢性肾功能衰竭积累了丰富的临床经验。但是，尚缺乏这些治疗的远期疗效观察，即上述中医治疗是否强化了进行性肾损害后的代偿功能?或可延缓肾组织纤维化的进展?我们通过中药验方的实验研究，观察其对防治肾小球硬化的作用。1材料和方法1.1实验材料实验动物:4周龄-20）、CollagenTypeⅣ抗体（山羊多克隆抗体，克隆号，C-

6、19），购自SANTACRUZ公司，二抗及相应试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。实验用中药验方的合剂，（△病理科、ˇ药理研究室）由成都中医药大学附属医院制剂室制备。1.2实验方法1.2.1方法购入4周龄asson三色染色;（2）PAS染色;（3）免疫组化SP法染色:分别做LN、CollagenTypeⅣ免疫组化染色，操作按说明书进行，设阳性对照及PBS液代替一抗的阴性对照，DAB显色。1.3.2染色结果判定（1）Masson三色染色，胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色。（2）PAS染色，肾小球内基质呈红色。（3）免疫组化SP法染色，阳性物质呈棕黄色，细丝、细颗粒状。1.3.3胶原纤

7、维IOD和肾小球基质相对IOD的检测在光镜200倍视野下，每张肾组织切片随机选择30个肾小球，利用MIAS-2000型图像分析系统（四川大学图形图像研究所）首先检测肾小球总面积，再检测相应肾小球内胶原纤维、肾小球基质的总IOD值，计算胶原纤维总IOD/肾小球个数、肾小球基质总IOD/肾小球总面积（肾小球基质相对IOD），分别代表胶原纤维的含量和肾小球基质含量。1.3.4LN、CollagenTyp