凋亡抑制基因survivin和gw112在barrett食管与食管腺癌中的表达及其意义

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1、凋亡抑制基因Survivin和GW112在Barrett食管与食管腺癌中的表达及其意义：赵俊杰，雷艳霞，任春蓉，赵晶，刘晓庆【摘要】目的探讨凋亡抑制基因Survivin和GethodsTheexpressionlevelsofsurvivinandGedicalTechCo,Ltd逆转录试剂盒，在PCR反应管中加入2μg总RNA，1μgRandomPrimer，加入RNasefree水，使终体积为15μL。70℃孵育10min冰上迅速冷却。然后冰上加入10×RTBuffer2.5μL，dNTPMix(12.5mmol/L)2.0μ

2、L，RNaseInhibitor(40Units/μL)0.6μL，RTEnzyme5u/μgmRNA，加DEPC水，使终体积为25μL。逆转录条件为：42℃，50min，95℃，3min。　　1.4实时荧光定量PCR　　1.4.1引物设计及合成以NCBIGenBank中提供的人类基因序列行引物设计，由北京奥科生物技术有限责任公司合成(表1)，以管家基因β-actin作为内参基因。表1引物序列　　1.4.2荧光定量PCR采用LifesonMedicalTechCo,LtdTePCRMasterMix(2×)12.5μL，上下游引物

3、(10μmol/L)各1μL，cDNA1μL，GreenDNAⅠdye(5×)3μL，用DEPC水将总反应体积调至25μL。置于ABIPRISM7000荧光定量PCR仪中按下述反应条件进行扩增。反应条件为：95℃15min，然后95℃30s，59℃1min(GW112此温度为58.5℃)，72℃30s共40循环。　　1.5统计学分析用目的基因与内参基因相对表达量的比值作为组织中Survivin和G：DNAMarker;1、2：对照;3、4：反流性食管炎阳性组;5、6：食管组;7、8：食管腺癌。　　2.3Survivin与GANN[

4、3]方法，进行PCR　　分析和标准曲线制作，Survivin、G19结合，消弱retinoicacid/IFNβ通路的诱导细胞凋亡的作用，从而抑制细胞凋亡，令肿瘤细胞恶性生长[5]。随后有分别采用表达串联分析、芯片杂交、实时荧光定量RT-PCR的方法证实了GER等[10]利用逆转录PCR技术测定BE化生-异型增生-腺癌演变过程中Survivin　　mRNA的表达情况，由高到低依次是：异型增生上皮组织>腺癌组织>对照组正常胃窦柱状上皮>Barrett化生上皮>正常鳞状上皮。由此认为Survivin是Barre

5、tt食管腺癌发生的一个潜在的生物标记物,能区分静止的BE上皮、异型增生的Barrett上皮和Barrett食管腺癌。本研究采用实时荧光定量PCR方法对反流性食管炎阳性、BE、EA患者食管黏膜组织中SurvivinmRNA的表达水平进行了检测，结果显示Survivin表达水平依正常对照、反流性食管炎阴性黏膜、反流性食管炎阳性、Barrett食管、食管腺癌的次序渐进增强，提示Survivin的表达贯穿于反流性食管炎、Barrett食管、食管腺癌发生、发展的始终，说明survivin过表达是BE增生过程中的一个早期事件。反流性食管炎、B

6、E、EA患者间SurvivinmRNA表达水平的明显差异提示通过定量PCR检测Survivin表达水平对Barrett食管与食管腺癌的早期诊断、预后判断有一定价值。　　综上所述，在BE与EA发生、发展过程中，凋亡抑制基因GANNT,MAUERERR,ZAHNA,etal.RealtimereversetranscriptionPCRexpressionprofilingofthepletehumanATP-indingcassettetransportersuperfamilyinvarioustissues[J].ClinC

7、hem,2003,49(2):230-238.　　[4]SHINOZAKIS,NAMURAT,IIMURAM,etal.UpregulationofReglαandGERD,PETERSJH,OhD,etal.Survivin,apotentialbiomarkerinthedevelopmentofBarrettsadenocarcinoma[J].Surgery,2005,138(4):701-706.