荨麻属植物对骨形成影响的研究

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1、荨麻属植物对骨形成影响的研究作者：史丽颖阎兴国周渊唐玲冯宝民王永奇【摘要】目的观察4种荨麻属植物的8种不同提取物对骨形成的影响。方法以成骨样细胞MC3T3-E1为靶细胞，以表皮生长因子为阳性对照，4种荨麻属植物的8种不同提取物分为50，100，200μg/ml3个浓度组，采用CCK-8(cellcountingkit-8)活细胞计数法测定4种荨麻属植物的8种不同提取物对成骨样细胞MC3T3-E1的增殖作用，同时测定碱性磷酸酶的活性。结果三角叶荨麻根的醇提物，宽叶荨麻全草的醇提物和醇提物水层过D101大孔树脂40%洗脱部分在50到200μg/ml的浓度下能显著促进成骨样细胞MC3T3-

2、E1增殖。同时这3种提取物一定程度上也增强了碱性磷酸酶的活性，但无显著性差异。结论三角叶荨麻和宽叶荨麻提取物在体外对成骨样细胞MC3T3-E1的作用提示其在体内可能促进骨形成过程。【关键词】荨麻属植物；成骨细胞；增殖；碱性磷酸酯酶；活性Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofEightextractsoffourUrticaplantsonboneformation.MethodsOsteoblasticMC3T3-E1cellalgroplesinthemedium.TheproliferationeffectofEIghtextractsoffou

3、rUrticaplantsoncloneMC3T3-E1cellsinedined.ResultsC3T3-E1cellproliferation.ThethreeextractsalsosometherootofU.triangularis,EtOHextractand40%EtOH-H2OfractionacroporousresinfromtheH2OpartitionofEtOHextractfromthe.subsp.laetevirensonMC3T3-E1cellsinvitrosuggestthattheymaystimulateboneformationinvivo

4、as.subsp.laetevirens，滇藏荨麻U.maireiLevl.，裂叶荨麻U.fissa为常用的民族药和民间药，具有祛风通络、平肝定惊、消积通便、解毒等功效，汉族、布依族、傈僳族、藏族等多个民族主要用于风湿性关节炎、风疹等病的治疗［6，7］，而对这4种荨麻属植物的抗骨质疏松作用未见报道。本文以成骨样细胞　MC3T3-E1为靶细胞，考察了4种荨麻属植物的8种不同提取物对其增殖作用的影响，并检测了相应的碱性磷酸酶的活性。1材料小鼠成骨样细胞MC3T3-E1细胞株由日本富山大学医学部宫原龙朗教授提供；表皮生长因子购自日本Funakoshi公司；前列腺素E2购自日本BiomolI

5、nternational实验室；小牛血清购自美国JRHBiosciences公司；α-MEM为美国IBiomedicals公司产品；活细胞计数试剂盒CCK-8(cellcountingkit-8)购自日本Dojin实验室。2方法2.1靶细胞以小鼠头顶骨细胞系MC3T3-E1为靶细胞，采用对照观察的方法，以表皮生长因子为阳性对照，同时设正常对照组（不加药，只加等量细胞悬液和培养基）和空白对照组（不加药和细胞悬液，只加等量培养基）。4种荨麻属植物的8种不同提取物分为50，100，200μg/ml3个浓度组，共12组。2.2MC3T3-E1细胞培养及形态学观察将MC3T3-E1细胞培养于1

6、00mm培养皿，含10%胎牛血清，50mg/l青霉素，30mg/l链霉素的15mmα-MEM培养基中，细胞浓度为5×105细胞/皿，置37℃，5%二氧化碳培养箱中进行培养，每隔48h进行一次传代培养。将MC3T3-E1细胞接种于24孔培养板上，每个孔加入含10%胎牛血清的α-MEM培养基400μl，细胞浓度为8×103/孔。待48h后，倒置显微镜下观察细胞形态变化。2.34种荨麻属植物的8种不同提取物对MC3T3-E1细胞增殖的影响［8，9］取上述48h培养后的细胞，用不含血清的α-MEM培养基冲洗细胞，然后加入含1%胎牛血清的α-MEM培养基，加入各浓度的荨麻属植物的8种不同提取物

7、，各组提取物样品最终浓度分别为50，100，200μg/ml。另设空白对照组（不加提取物样品，只加等量细胞悬液），生长因子(EGF,10ng/ml)阳性对照组，每组设4个复孔。开始测定增殖率，54h后用不含血清的α-MEM培养基冲洗细胞，然后加入含有10%活细胞计数试剂CCK-8的400μlα-MEM培养基，培养3h，然后在450nm波长下测定吸光度。计算平均增殖率。2.4荨麻属植物对MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶活性的影响［8，9］上述实验结果表明，三