余甘子叶提取成分没食子酸的体外抗肿瘤实验研究

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1、余甘子叶提取成分没食子酸的体外抗肿瘤实验研究作者：钟振国，梁红，钟益宁，张雯艳，潘志海，卢红梅，韦小清，黄金兰，李鹏【摘要】　　目的探讨从余甘子叶提取分离得到的活性成分没食子酸的抗肿瘤作用。方法采用MTT法和细胞集落形成法观察没食子酸对人肝癌细胞株Bele7404、人胃癌细胞株SGC7901、小鼠肝癌细胞株H22和小鼠肉瘤细胞株S1804种肿瘤细胞的体外抑制作用。结果MTT法和细胞集落形成法测定的结果均显示，当没食子酸浓度在2.5μg/ml以上时，4种肿瘤细胞株的生长均受到明显抑制。结论余甘子叶提取成分没食子酸在体

2、外对不同组织来源的肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用。【关键词】余甘子叶提取物没食子酸MTT法细胞集落形成法体外抗肿瘤作用　　Abstract：ObjectiveToisolatetheanti-tumoractivityponentsforgallicacidfromtheethanolextractoftheethylacetatefractionsoftheleavesofPhyllanthusemblicaL.MethodsThegroeasurementtechniqueinthehepatocellularc

3、arcinomaBele7404,stomachcarcinomaSGC7901,hepatomaH22andfibrosaraS180cellslineinvitro.ResultsMTTassayandcellcolonymeasurementtechniqueorcellslandabove.ConclusionTheresultssuggestthatgallicacidiscytotoxictothevarietyofthecancercells.　　KeyleavesofPhyllanthusembli

4、caL.；Gallicacid;MTT;Cellcolonymeasurementtechnique;Anti-cancereffectinvitro余甘子叶PhyllanthusemblicaL.系大戟科(Euphorbiaceae)叶下珠属Phyllanthus落叶小乔木或灌木的叶。余甘子树在我国主要分布在福建、广东、云南、贵州、四川、海南、广西等省区，资源丰富。《本草纲目》中记载:余甘子性凉,味甘酸涩,具有清热凉血、消食健胃、生津止咳之功效,民间常用来治疗消化不良、腹泻、咳嗽、乙型肝炎、腹水、便秘、肿瘤、发热

5、、皮肤病、高血压、胆囊炎及癌症等疾病［1］。余甘子叶在民间应用也较广泛，但有关余甘子叶的药理研究报道非常少。没食子酸是从余甘子叶提取分离出的两个化合物之一。为了了解没食子酸是否具有抗肿瘤作用，本实验将没食子酸在体外进行了抗癌活性研究。现报道如下。　　1材料与仪器　　1.1药物野生余甘子叶采自广西中部地区，经广西中医学院刘寿养教授鉴定。从余甘子叶提取分离得到化合物没食子酸。　　1.2肿瘤细胞株人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404均购自上海细胞生物研究所细胞库；小鼠肝癌细胞株H22和小鼠肉瘤细胞株S

6、180均购自广西中医药研究所。　　1.3试剂MTT（四甲基噻唑蓝）为德国Sigma公司产品，批号：020609；FBS（胎牛血清）为美国Hyclone公司产品，批号：0407；RPMI1640培养基为美国GIBCO公司产品，批号：1120708；Trypisn(胰蛋白酶)购自天津市景洋生物制品有限责任公司，批号：200503；DMSO（二甲基亚砜）购自天津汇英化学试剂有限公司，批号：20030526；1640完全培养液的配置RPMI1640完全培养液含3%谷氨酰胺、卡那霉素750μg/ml、10%或15%FBS。　

7、　2.2MTT法测定［2］在96孔培养板中每孔加入200μl（含有5000个/ml肿瘤细胞）10%FBS的RPMI1640培养液，置37℃，10%CO2培养箱中培养24h后（H22、S180离心处理），弃去旧培养液。实验组分别加入新的培养液190μl/孔，然后加入不同浓度没食子酸10μl/孔，使终浓度分别为1.25，2.5，5，10，20，40，80μg/ml,对照孔则加入200μl/孔新的培养液。每组4平行孔,置37℃,10%CO2培养液培养4d后，弃去上清液，加入200μl/孔新鲜配置的含0.2mg/mlMTT

8、的无血清培养液，37℃继续培养4h。4h后弃上清液，加入200μl/孔DMSO，振荡混匀后，用酶标仪（波长为570nm，参比波长为450nm）测定OD值，按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：肿瘤细胞生长抑制率（%）=（1-实验组平均OD值/对照组平均OD值）×100%［3］。　　2.3集落形成法［4］取对数生长期的SGC7901和Bele7404肿瘤细胞株