腺垂体不同细胞染色法的改良和应用

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1、腺垂体不同细胞染色法的改良和应用【摘要】目的探讨腺垂体不同细胞的染色方法，提高显示效果。方法选择不同动物的脑垂体，进行染色比较，确定最佳动物供体和染色方法。结果六种细胞以不同的颜色清晰地显示在一张切片上，色彩艳丽。结论该染色方法稳定可靠，有利于对不同细胞的鉴别，适用于教学和科学研究。【关键词】腺垂体特殊染色改良　　Improvementandapplicationofthehistologicalstainmethodinadenohypophysis　　Abstract：Objective:Tostudythespecialstainmethodofdifferentcellsinth

2、eadenohypophysis.Methods:Thehypophysisfromseveralkindsanimalsent.Inordertodeterminesuitableanimalsampleandthebeststainmethod,theslicesofthehypophysisesethodthatproved.Results:Sixkindsofcellsonstratedindifferentcolorsinthesameslice.Conclusion:Thegoodmethodisreliableandcaneasilydistinguishingvariou

3、skindscells.　　Keyprove　　脑垂体是人体内重要的内分泌器官，其结构复杂，特别是腺垂体的细胞种类多，用常规染色方法不能显示各种细胞的形态，故很难对各种细胞的组织学结构和病理变化进行观察和研究，为教学和科研带来很大困难。虽然免疫组织化学的方法能区别某种细胞，但不能做到六种细胞同时显示，且操作复杂，要求条件高，试剂昂贵，限制了应用。为此，我们经过反复试验改进，成功地使六种细胞在同一张切片上清晰的显示出来，色彩艳丽，对比明显，为教学和科研提供了有效的方法，现将此法介绍如下。　　1材料和方法　　1.1材料　　　　取健康成年猪的脑垂体（由山东农业大学畜牧专业实验室提供），雌雄不限

4、，将猪处死后放血，立即开颅，找到颅底的垂体窝后将垂体取出，取材时操作轻柔，共取材6个；同时取大白鼠和兔子的脑垂体各六个，取材方法同上。取材后立即10%福尔马林固定12h。　　1.2方法　　1.2.1切片脑垂体固定后常规处理，石蜡包埋切片，切片厚5μm，顺利做连续切片，无断裂破碎现象。将切片贴裱到载玻片上，40℃温箱内烘干备用。　　1.2.2染色切片常规脱蜡到水，蒸馏水洗入过甲酸液5min：88%甲酸40ml、双氧水4ml、浓硫酸0.5ml。自来水冲洗10min。蒸馏水洗入阿利新兰液，室温下过夜：阿利新兰2g、2N硫酸100ml，加热溶解过滤。自来水冲洗10min，蒸馏水洗。PAS染色，入

5、1%过碘酸（新配）5min，蒸馏水洗数次，Schiff试剂10min，（Schiff试剂配法：蒸馏水200ml煮沸，停火后加碱性品红1g，不停搅拌溶解，溶液冷却至50℃时，加入1N盐酸20ml，冷却至室温，加偏重亚硫酸钾1g溶解混匀，置暗处过夜，再加活性炭2g，充分摇荡混匀过滤，滤液呈无色或淡黄色，装入有色瓶中，放4℃冰箱内保存备用。）自来水冲洗20min，蒸馏水洗。0.5%偶氮卡红液30s，（56-60℃）：偶氮卡红0.5g、蒸馏水100ml，蒸馏水洗。2%橘黄G染液30～40min：橘黄G2g、磷钨酸1g、蒸馏水100ml。0.1%苯胺酒精分化数秒钟，蒸馏水洗。常规脱水、二甲苯透明，

6、中性树胶封固。　　2结果　　HE染色的脑垂体切片把腺垂体的细胞分为三种，嗜酸性细胞被染成桃红色，嗜碱性细胞被染成紫红色，嫌色细胞被染成浅灰色（图1）。　　图1HE染色：嗜碱性细胞紫红色，嗜酸性细胞桃红色，嫌色细胞浅灰色。（略）　　上述染色方法将腺垂体的腺细胞根据功能不同染成不同的六种颜色：催乳激素细胞（LTH）呈橘红色，生长激素细胞（STH）呈黄色，促性腺激素细胞［卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素（LH）］呈紫红色，促甲状腺激素细胞（TSH）呈紫蓝色，促肾上腺皮质激素细胞（ACTH）呈灰蓝色，嫌色细胞浅灰色。六种细胞各具特色，色彩艳丽，细胞边界清晰；核染色淡，核仁明显（图2）。　　图2特

7、殊染色：LTH细胞橘红色，STH细胞黄色，FSH细胞和LH细胞紫红色，TSH细胞紫蓝色，ACTH细胞灰蓝色，嫌色细胞浅灰色。（略）　　3讨论　　　　组织学切片质量的优劣直接影响实验教学效果和科学研究的成败。俗话说“工欲善其事，必先利其器”。脑垂体分为腺垂体和神经垂体两部分，腺垂体是由两类内分泌细胞组成，即嗜色细胞和嫌色细胞。嗜色细胞根据其HE染色结果分为嗜酸性细胞和嗜碱性细胞。嗜酸性细胞根据其分泌物性质的不同分为两种：催乳激素细胞和