纤维素酶在提取长春花碱中的应用

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1、纤维素酶在提取长春花碱中的应用作者：何际婵，董志超*，王建荣，晏小霞【摘要】目的研究纤维素酶在提取长春花生物碱中的应用。方法采用酸水浸提法和酶浸提法提取长春花中的长春碱、长春质碱、文多林，高效液相色谱(HPLC)法测定其含量。结果酸水浸提法和酶浸提法提取的长春碱、长春质碱、文多林含量分别为0.0158和0.0052mg/ml;0.0456和0.0204mg/ml;0.0898和0.0421mg/ml。结论在单位时间内酶提法可显著提高长春碱、长春质碱、文多林的收率，可考虑将酶解法用于工业上长春花生物碱的提取中。【关键词】长春花;长春碱;长春质碱;文多灵;纤维素

2、酶　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofcelluloseenzymeonextractionofalkaloidfromCatharanthusroseus.MethodsHPLCmethodinethecontentsofvinblastine,catharanthineandvindolinefromC.roseus.Resultsparedaticmethodextractionyieldofvinblastine,catharanthineandvindolineC.roseuscanbeeffectively

3、increasedbyusingenzymaticextractionprocess.ItisavailabletouseenzymeinextractionalkaloidfromC.roseus.　　Keye　　长春花Catharanthusroseus(Linnaeus)G.Don是夹竹桃科(Apocynaceae)长春花属一种重要的药用植物。长春花植株中含有极其复杂的萜类吲哚生物碱家族，其中的长春碱(Vinblastine)为目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤药物之一，可用于治疗何杰金氏病、恶性淋巴肿瘤等疾病[1，2]。而长春质碱(Catharanthi

4、ne)、文多林(Vindoline)是半合成另一癌症治疗一线药物长春瑞滨的原料[3]。目前工业上长春花生物碱的提取方法主要为酸水浸提法，该方法存在着有效成分提取率低、耗时较长的问题。近年来，纤维素酶的应用日益广泛，特别是在提取天然产物中的有效成分，纤维素酶可将植物细胞壁破坏并将纤维素软化，能使细胞内的有效物质充分释放出来，较大幅度提高天然植物中有效成分的提取率[4]。本实验用纤维素酶浸提长春花粉末提取长春花生物碱，显著提高了长春碱、长春质碱、文多林的提取率，缩短了提取时间，且用纤维素酶提取长春花生物碱尚无同类报道。　　1仪器与试药　　1.1仪器微孔滤膜过滤。

5、　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为HypersilBDS-C18(4.6mm×250mm，5μm)柱;流动相为380ml水-二乙胺(986∶14，用磷酸调pH7.2)与620ml甲醇-乙腈(4∶1)混合;流速1.0ml/min;柱温为25℃;检测波长260nm;进样量10μl。色谱图见图1。　　1.文多林2.长春质碱3.长春碱　　图1混合对照品(A)和长春花酶提取样品(B)的HPLC图谱　　2.2标准品溶液的制备精密称取适量长春碱、长春质碱、文多林对照品，用5ml甲醇溶解并置于同一容量瓶中，摇匀，用甲醇定容。三者配置的浓度分别为0.3586，0.48

6、42和0.9546mg/ml。保存于4℃冰箱备用。　　2.3供试品溶液的制备　　2.3.1酸水浸提法精密称取长春花全草粉末20g，精密加入pH4.0的酸水溶液200ml，置于恒温水浴12h。滤过，滤液加氨水调pH值至8.0，以200ml的四氯化碳分5次等量萃取，合并萃取液挥干。残渣加甲醇适量溶解，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。置冰箱备用，上样前经0.45μm微孔滤膜过滤。　　2.3.2酶浸提法精密称取长春花全草粉末20g，精密加入含0.5g纤维素酶pH4.0的酸水溶液200ml，置于恒温水浴12h。后续处理方法同酸水浸提法。　　2.4线性关系考察分别

7、精密量取上述对照品溶液各0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml分别置于10ml容量瓶中，摇匀，用甲醇定容。精密吸取各浓度溶液10μl注入液相色谱，按“2.1”项下色谱条件测定相应HPLC图谱的峰面积。以长春碱、长春质碱、文多林进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表1。表1各长春花生物碱标准曲线回归方程和线性范围　　2.5精密度实验上述条件下，对同一混合对照品溶液重复测定7次，测得峰面积的RSD分别为：长春碱0.58%，长春质碱0.82%，文多林0.54%，说明精密度较好。　　2.6重复性实验对同一批样品按供试品溶

8、液的制备方法平行制备5份，分别进样10μl，同时取混