纤维素酶在提取长春花碱中的应用论文

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1、纤维素酶在提取长春花碱中的应用论文何际婵，董志超*，王建荣，晏小霞【摘要】目的研究纤维素酶在提取长春花生物碱中的应用。方法采用酸水浸提法和酶浸提法提取长春花中的长春碱、长春质碱、文多林，高效液相色谱(HPLC)法测定其含量。结果酸水浸提法和酶浸提法提取的长春碱、长春质碱、文多林含量分别为0.0158和0.0052mg/ml;0.0456和0.0204mg/ml;0.0898和0.0421mg/ml。结论在单位时间内酶提法可显著提高长春碱、长春质碱、文多林的收率，可考虑将酶解法用于工业上长春花生物碱的提取中。【关键词】长春花;长春碱;长春质碱;

2、文多灵;纤维素酶Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofcelluloseenzymeonextractionofalkaloidfromCatharanthusroseus.MethodsHPLCmethodinethecontentsofvinblastine,catharanthineandvindolinefromC.roseus.Resultsparedaticmethodextractionyieldofvinblastine,.freelC.roseuscanbeeffectivelyincrea

3、sedbyusingenzymaticextractionprocess.ItisavailabletouseenzymeinextractionalkaloidfromC.roseus.Keye长春花Catharanthusroseus(Linnaeus)G.Don是夹竹桃科(Apocynaceae)长春花属一种重要的药用植物。长春花植株中含有极其复杂的萜类吲哚生物碱家族，其中的长春碱(Vinblastine)为目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤药物之一，可用于治疗何杰金氏病、恶性淋巴肿瘤等疾病1.freel微孔滤膜过滤。2方法与结果2.1色谱

4、条件色谱柱为HypersilBDS-C18(4.6mm×250mm，5μm)柱;流动相为380ml水-二乙胺(986∶14，用磷酸调pH7.2)与620ml甲醇-乙腈(4∶1)混合;流速1.0ml/min;柱温为25℃;检测波长260nm;进样量10μl。色谱图见图1。1.文多林2.长春质碱3.长春碱图1混合对照品(A)和长春花酶提取样品(B)的HPLC图谱2.2标准品溶液的制备精密称取适量长春碱、长春质碱、文多林对照品，用5ml甲醇溶解并置于同一容量瓶中，摇匀，用甲醇定容。三者配置的浓度分别为0.3586，0.4842和0.9546mg/m

5、l。保存于4℃冰箱备用。2.3供试品溶液的制备2.3.1酸水浸提法精密称取长春花全草粉末20g，精密加入pH4.0的酸水溶液200ml，置于恒温水浴12h。滤过，滤液加氨水调pH值至8.0，以200ml的四氯化碳分5次等量萃取，合并萃取液挥干。残渣加甲醇适量溶解，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。置冰箱备用，上样前经0.45μm微孔滤膜过滤。2.3.2酶浸提法精密称取长春花全草粉末20g，精密加入含0.5g纤维素酶pH4.0的酸水溶液200ml，置于恒温水浴12h。后续处理方法同酸水浸提法。2.4线性关系考察分别精密量取上述对照品溶液各0

6、.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml分别置于10ml容量瓶中，摇匀，用甲醇定容。精密吸取各浓度溶液10μl注入液相色谱，按“2.1”项下色谱条件测定相应HPLC图谱的峰面积。以长春碱、长春质碱、文多林进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表1。表1各长春花生物碱标准曲线回归方程和线性范围2.5精密度实验上述条件下，对同一混合对照品溶液重复测定7次，测得峰面积的RSD分别为：长春碱0.58%，长春质碱0.82%，文多林0.54%，说明精密度较好。2.6重复性实验对同一批样品按供试品溶液的制备方法平行制

7、备5份，分别进样10μl，同时取混合对照品溶液10μl进样测定，按外标法测定其含量，结果证明重复性良好，RSD分别为:长春碱0.56%，长春质碱0.45%，文多林1.3%。2.7稳定性实验按“2.1”项下色谱条件，对同一供试品，在保存0，4，8，12，24h后，用当日新配置的对照品溶液按外标法测定相应的峰面积，并计算长春碱、长春质碱和文多林的RSD分别为:长春碱0.89%，长春质碱0.76%，文多林0.38%，说明这3种成分在24h内稳定。2.8回收率实验分别精密称取已知含量的同一长春花全草粉末6份，分别定量加入混合对照品溶液各0.5，0.5

8、，1.0，1.0，2.0，2.0ml，按样品溶液制备方法回收供试品溶液，并按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表2。表2各长春碱回收率实验结果2.9样品含量测